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核酸DNA純化提取磁珠的質量判斷標準

2016-11-29 9:31:58點擊:


生物磁珠是生物化學與材料學的有效結合,磁珠兼具液體流動性和固體磁性材料的特點,在外磁場的作用下可以定向移動和集中,當外磁場撤去后,稍加振蕩或抽吸即可均勻分散于液體中。隨著生物學研究的深入和材料技術的進步,生物磁珠在生物技術領域的應用越來越廣泛和深入。其中核酸提取用磁珠廣泛應用于各種核酸提取試劑盒,發展迅速,約占生物磁珠市場的半壁江山。但是核酸提取用磁珠門類眾多,各家產品良莠不齊,為核酸提取的穩定性帶來不確定性。因此本文和大家談談核酸提取磁珠的評判標準:

1、磁珠的結構

生物磁珠的種類是多種多樣的,磁珠為核殼結構,中心為氧化鐵內核,中層包裹封閉基質,外層修飾官能團。中層基質不同,磁珠的基本性質會有所不同;修飾的官能團不同,磁珠的吸附特性會有所不同。即便是相同的封閉基質和官能團,基質的包被工藝不同,會造成基質厚度、孔容、孔徑、比表面積不同,所能吸附的顆粒粒徑偏好也會有所不同;即便是修飾相同的官能團,官能團修飾工藝不同,會造成官能團密度、臂長不同,所攜帶的表面電荷、斥力、氫鍵數量不同,吸附能力會隨之改變。

由此可見,磁珠的種類是多種多樣的,制作過程中一點微小的變化,都會制出完全不同的磁珠。而不同的磁珠基本特性不同,用于實驗中吸附和釋放吸附物的條件也完全不同,所以不同磁珠適用的領域也有所區別。


2、DNA提取磁珠的重要參數

DNA提取磁珠應用于DNA吸附與提取純化的領域,具有一些重要的參數要求,如半沉降時間,磁吸時間,粒徑,比表面積,表面官能團密度等。

PuriMag的DNA提取磁珠,經過反復試驗,有著嚴格的生產工藝,專用于吸附DNA的相關實驗,具有分散性好,半沉降時間長,性質穩定等優點。

2.1、DNA提取磁珠的懸浮性

因為磁珠雖然具有一定的流動性,能夠均勻分散在液體中,跟隨液相進入實驗體系,但磁珠畢竟還是固體,會在液體中以一定速度沉降。所以磁珠的半沉降時間應在5min以上,才能保證磁珠在混勻后到加入樣本中的過程中不因為沉降過快而導致加入量不準確,才能滿足自動化提取的高通量實驗。普瑞邁格的DNA提取磁珠,半沉降時間可達15min以上,良好的懸浮性,使實驗不用頻繁混勻磁珠,同時增加了實驗的穩定性和均一性。

2.2、DNA提取磁珠的磁吸時間

磁珠攜帶目的DNA與體系中雜質分離的過程,主要是通過外加磁場使磁珠定向移動并達到固液分離的目的,所以磁珠的磁吸時間會影響固液分離的時間。普瑞邁格DNA提取磁珠,磁吸時間均小于20s,非常適應手動和儀器操作進行核酸純化的實驗頻率。

2.3、DNA提取磁珠的比表面積

部分使用磁珠的實驗人員認為粒徑越小的磁珠比表面積越大吸附效果也越好,這種想法并不完全正確。因為磁珠表面并不是光滑平整的球面,而是在中間基質層有孔洞,外圍修飾集團有凸起的,比表面積并不由粒徑大小決定,而且也并不是比表面積越大吸附效果就越好的。有研究表明,當比表面積在60m2/g時,對核酸的吸附效果較好。粒徑在300nm左右的磁珠包被基質層薄內陷孔洞少,孔容孔徑低;粒徑在1um左右的磁珠包被基質層厚,表面有大量孔洞,兩者比表面積都可以達到60m2/g左右。但是有孔洞的結構可能會帶來洗脫的效率降低。普睿邁格的DNA提取磁珠,采用300nm無孔凸起包覆,不僅增大比表面積和吸附性能,且不會帶來洗脫步驟的困難,因此表現出高于同類產品的核酸回收率。

2.4、DNA提取磁珠的官能基團

一般認為磁珠表面官能團能越密集,對核酸的吸附效果越好,但考慮到空間位阻、電荷斥力,過高濃度使官能團陷入磁珠內部等原因,DNA提取磁珠的表面官能團數量并不是無限制越多越好的。適當的降低磁珠生產過程中官能團修飾原料,可以很好的控制DNA提取磁珠的粒徑和吸附量平衡。


3、結語

除了磁珠本身的性質之外,提取純化DNA的過程中,使用的試劑體系也要和磁珠相匹配,能夠提取DNA的磁珠種類很多樣,不僅包被的中層基質可能不同,表面修飾的官能團也并不盡相同,不同磁珠適用的試劑體系是有區別的,吸附原理也不同,需要使用者根據具體情況進行不同的調整和測試。

面對不同的磁珠產品,選擇標準的DNA提取磁珠生產廠家,是效率最高的方法。國內普睿邁格、惠爾、納微等廠家的生物磁珠由于市場同類產品,且性價比明顯由于國外產品。

更多核酸提取磁珠請參考核酸提取磁珠產品頁 http://www.posuichina.com/Product/Simagbead/DNA-MNP/