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PuriMag NGSbead磁珠專為二代測序建庫時DNA的選擇性或非選擇性回收,以及PCR產物的純化回收而設計。該片段分選試劑盒適用于高通量測序文庫(NGS)構建中DNA 片段大小快速分選和回收。PuriMag NGSbead直接分散在結合緩沖液中,調整磁珠懸浮液和樣品的體積比,可以選擇左側、右側或雙側尺寸的DNA 片段。純化后的片段不含核苷酸、引物二聚體、接頭、酶和鹽等污染物。PuriMag NGSbead為新一代測序工作流程提供了高效的基于磁珠的凈化系統,是專門為配套自動化工作臺開發的大規模、高通量的片段分選試劑盒,可以適用于幾乎所有自動化儀器,也可人工進行少量樣品的片段分離。
鄭重提示:對于一次訂購量大者,本品將提供極具競爭力的市場價格,實現最優性價比。
■ 產品性能 洗脫得到的DNA純度高,A260/A280的比值在 1.7-1.9之間, A260/A230的比值通常在2.0以上。磁珠回收率高, 500bp以上回收>90%,200bp以上回收>80%,100bp以上回收>70%。
■ 應用方向 ? 高通量測序文庫(NGS)構建中DNA 片段大小快速分選和回收; ? 可以選擇左側、右側或雙側尺寸的DNA 片段; ? 1.8倍體積懸浮液結合后,洗滌,洗脫,可用于PCR、酶反應產物的純化。
■ 注意事項 1、 磁珠保存在去離子水中,冷凍、干燥和離心可能會影響磁珠的使用效果; 2、 磁珠由于重力作用而沉降屬正常現象,使用前,務必充分振蕩混勻磁珠;
■ 使用方法 試劑組成
PuriMag NGSbead:使用前渦旋20秒,使其徹底混勻。 Wash buffer: 80%乙醇(現配現用,4℃保存時間不超過7天); Elution buffer: 10 mM Tris-HCl(PH 8.0)或去離子水;
一、 第一次磁珠分選(去除不需要的大片段DNA) 1. PuriMag NGSbead磁珠室溫放置30 min,渦旋混勻至磁珠懸液顏色均一。參考表1,向反應液中加入適量的磁珠溶液,吹打至少10 次以混勻混合液,室溫靜置5 min。
二、 第二次磁珠分選(去除不需要的小片段DNA) 1. 渦旋重懸混勻PuriMag NGSbead磁珠至顏色均一,將磁珠溶液加入上述上清中(參考表1),吹打至少10 次以混勻,室溫靜置5 min。 2. 將96 孔板放在磁力架上分離磁珠,靜置至少5 min,直至上清完全澄清。 3. 小心移棄含有不需要DNA 的上清。(注意:不要丟棄磁珠)
三、 乙醇清洗 1. 乙醇清洗步驟中,需要將96 孔板放在磁力架上,在清洗過程中勿碰觸磁珠。加入200 μL 的80%乙醇,室溫靜置至少30 s,移棄上清。重復該步驟一次。
四、 洗脫 1. 將96 孔板放在磁力架上,室溫靜置5 min,揮發殘留的乙醇。(注意:干燥至管底無明顯液滴;勿過度干燥磁珠,防止DNA 回收效率過低)。 2. 從磁力架上移走96 孔板,加入10-50 μL 的Elution buffer重懸吹打或振蕩混勻磁珠,室溫放置2-5 min。(Elution buffer在65-70℃中預熱后洗脫效果更好) 3. 將96 孔板放置在磁力架上。溶液澄清后,轉移上清至新的96 孔板中。 注意:1. 提供的操作步驟是去除小片段和大片段,獲得中間范圍內片段的過程。若實驗目的是去掉小片段回收大片段或去掉大片段回收小片段,僅需選擇合適的磁珠溶液比例操作即可。 2. 該試劑盒磁珠溶液可用于300 bp~800 bp 片段的回收。 3. 由于回收獲得的片段的大小與磁珠溶液和樣品比例有關,加樣量的準確性十分重要,且樣品體積盡量不要太小,減少加樣誤差,一般在50 μL~150 μL 范圍。
客戶文章:
1. Li X, Chen L, Liu T, et al. Integrated analysis of ATAC-seq and transcriptomic reveals the ScDof3-ScproC molecular module regulating the cold acclimation capacity of potato[J]. Plant Physiology and Biochemistry, 2024, 210: 108576.
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