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1. 概述
PuriMagTM G-NHS功能化磁性納米粒子是均一的、聚合物包覆的超順磁納米粒，親水表面確保磁珠在各種緩沖液中具有出色的分散性、低非特異吸附和易操作性，表面涂有高密度NHS（N-羥基琥珀酰亞胺）官能團可永久共價偶聯含伯胺的配體。表面涂有高密度NHS（N-羥基琥珀酰亞胺）官能團。配體中的其他活性基團無需在偶聯之前進行保護。耦合很快（室溫pH 6.5~9下15~30分鐘，4℃下4小時）。 PuriMagTM G-NHS磁珠最適合與大蛋白或小肽結合。
NHS磁珠偶聯機理：
2. 產品信息
Product Specifications
Description
Polymer coated Fe3O4 nanoparticles
Particle Size
200 nm
Number of Beads
~1.7×1010 beads/mg
Matrix
Proprietary polymer
Functional group
NHS group
Group density
~300 μmole / g of Beads
Magnetization
60~70 EMU/g
Formulation
10 mg/ml suspension in Acetone
Stability
pH 3.5~10, 4~80 ℃, most organic solvents
Storage
1 year at 2~8 ℃. Do not freeze.
3. 使用方法
注意：1）以下方案是將含胺的配體與PuriMagTM G-NHS活化的磁珠偶聯的示例。強烈建議進行滴定，以優化用于每種單獨應用的磁珠量。該方案可以相應地按比例放大和縮小。
2）偶聯緩沖液的離子強度對于獲得更高的耦合效率至關重要。
3）偶聯緩沖液應具有最小的離子強度，并且不應包含任何氨基（例如Tris），但洗滌或儲存緩沖液可以包含氨基或羧基。
A. 所需材料
1）磁力架（用于手動操作）：用于容納12個單獨的1.5~2ml離心管；用于容納2個50 ml離心管或2個15 ml離心管
2）偶聯緩沖液：10 mM磷酸鉀、0.15 M NaCl、pH 5.5（注意：pH 6.5~9可用于偶聯，但是在pH?5.5時可獲得最高偶聯效率）；
3）洗滌緩沖液：0.05 M Tris-HCl、0.5 M NaCl、pH 8.0；
4）封閉緩沖液：1 M乙醇胺、pH 9；
B. 蛋白質偶聯
1）稱重并將30 mg磁珠轉移到離心管中。
2）將0.5-1 mg蛋白質/肽溶解在1ml偶聯緩沖液中。
注意：NHS激活的磁珠的耦合效率因配體而異。使用者應根據經驗優化配體的濃度。建議蛋白質結合使用0.5~10 mg / ml。對于小肽，配體的濃度應為每毫升至少200μmol配體。
3）將蛋白質溶液添加到磁珠中。重懸磁珠，并通過移液或渦旋混合非常均勻。在室溫下連續旋轉孵育反應4~6小時或過夜。
4）將試管放在磁力分離器上1-3分鐘。當試管保留在分離器上時，除去上清液。從分離器中取出試管，并用1 ml洗滌緩沖液渦旋懸浮30秒。磁分離，除去上清液。
5）按照步驟4所述，用1 ml洗滌緩沖液（或1 M NaCl）洗滌磁珠3-4次。
6）向PuriMagTM磁珠中添加0.5-1ml封閉緩沖液（珠也可以被PBS，pH7.4、0.1％BSA封閉），在室溫下孵育1小時或在4°C下孵育過夜。
7）按照步驟4所述，用1ml冷洗滌緩沖液洗滌磁珠3次。
8）將磁珠重懸于pH 7.4、0.1％BSA和0.1％疊氮化物（w / v）的PBS緩沖液中至所需濃度，并保存在4°C下直至使用。不要凍結。
（本磁珠僅供科研使用！）
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