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細胞轉染是將外源性分子如DNA,RNA等導入真核細胞內的專門技術,是研究基因表達調控、突變分析、基因沉默、蛋白質等的工具,目前已成為生物和醫學等研究實驗室廣泛使用的基本技術。磁轉染(Magnetofectio)是一種新穎、簡單、高效的轉染培養細胞的方法。它利用多聚陽離子進行表面修飾的磁性粒子作為載體攜載基因,它們帶有陽性電荷易于和有陰性電荷的DNA結合,并通過磁力將載體吸引到靶細胞,進而被靶細胞吸收。磁轉染可使攜載的基因在幾分鐘內富集在細胞表面,使得100%的細胞與顯著的載體劑量接觸。因而具有如下優勢:
l 與標準轉染相比,轉染細胞百分比大大提高了轉染率。
l 與短期孵育后的標準轉染相比,轉基因表達水平提高了數千倍。
l 極低的載體劑量可實現高轉染率和高轉基因表達水平,從而節省昂貴的轉染試劑。
l 極短處理時間。與標準程序數小時比,用基因載體孵育細胞幾分鐘就足以產生高轉染效率。
磁轉染的使用方法極簡單。最佳轉染條件對于不同細胞系或細胞可能不同,需要通過優化確定最佳條件。優化后的條件可反復用于轉染同一細胞系或細胞。要優化的條件包括:轉染試劑與核酸或病毒的比例、核酸的量、細胞密度、孵育時間等。
1.產品特性
MagTransPoly是一種普遍適用的磁性顆粒制劑,用于高效核酸遞送。 它與待轉染的核酸以一步法混合,并已成功用于質粒DNA、反義寡核苷酸和siRNA。產品具有如下特性:
n 產品為褐色澄清水膠體,規格10ml(濃度1mg/ml);
n 表面 Zeta 電位:pH 7.4 約+40 mV ;
n 磁性:具有超順磁性,飽和磁化強度約 60 emu/g ;
n 具有高的表面正電荷,因而具有高負載量及高轉染效率,膠體穩定性好;
n 已采用 0.22 微米濾膜過濾除菌,在磁標板作用下易被細胞吞噬,可用于 DNA 或 RNA 的高效轉染實驗研究;
n 試劑盒中所有試劑請常溫保存(20-25°C)。第一次使用后請儲存于 4~8°C。常溫運輸。磁性納米粒子勿冷凍,不要向儲存液中加入任何其它試劑。
2.使用方法
以下說明已成功應用于各種細胞系的樣品方案。 請注意,最佳條件因細胞系而異。 因此,可調整所用DNA或RNA的量以及各個組分的比例以獲得最佳結果。 以下建議可用作指導,以最短的孵育時間實現良好的轉染。
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