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1. 概述
PuriMagTM G-SH巰基功能化磁性納米粒子是均一的、聚合物包覆的超順磁納米粒，親水表面確保磁珠在各種緩沖液中具有出色的分散性、低非特異吸附和易操作性。巰基是一種官能團，含有與氫原子相連的硫原子，常以后綴"-thiol" 和前綴 "mercapto-" 或 "sulfanyl."表示，硫醇對軟金屬有強烈的偏好。巰基磁珠專門設計用于偶聯SMCC（磺基琥珀酰亞胺基 4-[N-馬來酰亞胺甲基]環己烷-1-羧酸酯）修飾的蛋白質/肽。SMCC 包含一個胺反應性N-羥基琥珀酰亞胺（NHS酯）和巰基反應性馬來酰亞胺基團。NHS酯類與伯胺發生反應在pH 7-9下形成穩定的酰胺鍵。馬來酰亞胺在pH 6.5-7.5下與巰基反應，形成穩定的硫醚鍵。這樣品制備過程快速直接，無需費力的重復移液和離心。PuriMagTM G-SH巰基磁珠是偶聯大蛋白或小肽的理想選擇。PuriMagTM G-SH磁珠適用于各種磁分離應用，包括親和力富集、蛋白質純化、免疫沉淀和細胞分選。
特點和優點：
w 偶聯條件：pH7.2、12 h 偶聯較高效；
w 穩定的共價鍵和低水平的配體泄漏；
w 產生可重復使用的免疫親和基質；
w 低非特異性結合；
w 應用：抗體、蛋白質/肽、DNA / RNA的純化；細胞分選；免疫沉淀；
w 偶聯方便快速；
w
偶聯示意圖：
2. 產品信息
Product Specifications
Description
Polymer coated Fe3O4 nanoparticles
Particle Size
200 nm
Number of Beads
~1.7×1010 beads/mg
Matrix
Proprietary polymer
Functional group
Sulfhydryl group
Group density
~300 μmole / g of Beads
Magnetization
60~70 EMU/g
Formulation
10 mg/ml suspension in ethanol
Stability
pH 3.5~10, 4~80 ℃, most organic solvents
Storage
1 year at 4~8 ℃. Do not freeze.
3. 使用方法
注意：以下方案是將將蛋白質和/或肽偶聯至PuriMagTM巰基活化磁性納米粒子的示例。
強烈建議針對具體樣本優化磁珠用量。如配體負載太低，則可能導致非特異結合。如配體負載過高，可能會導致空間位阻。建議每g磁珠使用1~50 mg蛋白或0.1~5 mg肽來制成親和基質。該方案可相應地按比例放大和縮小。
A. 所需材料
1）磁力架（用于手動操作）：用于容納12個單獨的1.5~2ml離心管（Mrack02）；用于容納2個50 ml離心管或2個15 ml離心管（目錄號Mrack03）
2）偶聯緩沖液：PBS, PH 7.2； SMCC (Sulfosuccinimidyl 4-[N-maleimidomethyl]cyclohexane-1-carboxylate) or Sulfo-SMCC ；
B. 蛋白質/肽制備：
1. 用 50 倍體積的 PBS（pH 7.2, 5mM EDTA）透析蛋白質/肽。
2. 在蛋白溶液中加入適量SMCC，混合均勻。
注意：制備SMCC溶液（3.7mg/ml的DMF溶液。如果 SMCC 沒有完全溶解，請將試管放入 50°C 的水中泡幾分鐘。將 100 ul SMCC 溶液加入 1 ml 蛋白質溶液 （10mg/ml） 中。或將 50 ul SMCC 溶液加入 1 ml 蛋白質溶液（<1mg/ml）。
3. 在 + 4°C 下孵育 2 小時或室溫孵育 30 分鐘。
4. 去除 Sephadex G15 色譜柱上的游離 SMCC 和未修飾的蛋白質。用PBS緩沖液洗脫。蛋白質SMCC的洗脫可以用分光光度計在206nm處監測。
C．磁珠制備：
注意：稱重，用PBS（濃度：10mg/ml）懸浮磁珠，通過劇烈渦旋分散磁珠，然后在 4°C 下儲存。在完全使用之前搖晃瓶子以重懸磁珠。
1. 搖晃瓶子，徹底重懸巰基磁珠。
2. 將 100μl珠子 （10 mg/ml） 轉移到試管中。將試管放在磁架上 1-3 分鐘。移除上清液，而試管留在架子上。
3. 取出試管，用200μlPBS緩沖液徹底重懸珠子。將試管在室溫下放置 2-3分鐘。將試管放在磁架上 1-3 分鐘。當試管留在架子上時取出上清液。
4. 重復步驟 3 兩次。
5. 將磁珠與 1 ml DTT（二硫蘇糖醇 3 mg/ml）在室溫下孵育 15 分鐘，然后用PBS緩沖液洗滌磁珠3次。
6. 將還原的磁珠與蛋白質-SMCC 偶聯物混合，并在 +4°C 下孵育 12 小時。
7. 清洗磁珠并將它們重懸于所需的緩沖液中。
（本磁珠僅供科研使用！）
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