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貨號
規格
MS-STV001
1 ml
MS-STV010
10 ml
1. 產品描述
MagStart-Streptavidin磁珠是一種專有的磁性聚合物微粒，為分離或固定包括生物素化生物分子提供了一種簡單方便的方法。MagStart-Streptavidin磁珠經特殊處理，使其抵抗trypsin和LysC蛋白酶水解能力提高100倍，避免了基于質譜的蛋白質組學研究中鏈霉親和素酶解肽的污染，從而減少了樣品處理和MS分析時間，提高整體靈敏度并增加采樣深度。MagStart磁珠是一種超多孔聚合物網絡，允許分子在整個微粒內滲透和結合，因而具高容量結合目標生物素化生物分子的能力。該產品由磁微粒共價連接重組SA（~55 kDa）組成。高密度官能團可極大增加生物分子負載量，提高穩定性并降低SA浸出的可能性。MagStart-Streptavidin為生物素化寡核苷酸和蛋白質提供了無與倫比的能力。該產品應用包括生物素化核酸和蛋白的分離、細胞分離、DNA/RNA 結合蛋白的分離和免疫測定。與MagReSyn? Streptavidin MS有等同效果。
（抗trypsin和LysC蛋白酶水解能力提高100倍）
Product Specifications
Description
Iron oxide-containing magnetic polymer microspheres
Application
Isolation and purification of biotinylated biomolecule
Matrix
Proprietary polymer
Core
Iron (II, III) oxide (Magnetite)
Functional group
Streptavidin (55 kDa)
Binding capacity
≥3,000 pmoles/mg biotinylated oligonucleotide (24 mer), ≥300 μg/mg biotinylated IgG
Particle Size
~5–10 μm
Formulation
10 mg/ml in 80 mM Phosphate, pH 7.5, 150 mM NaCl, 1.5 mM EDTA, 0.05% Tween? 20, 0.02% sodium azide (NaN3)
Stability
pH 3~10, 4~60 ℃
Storage
Store at 4–8?C until expiry date on label DO NOT FREEZE
注意：不當儲存、微粒干燥、細菌污染或離心回收可能導致容量/性能的不可逆損失。使用前應充分混勻。
MagStart-Streptavidin微粒極高的官能團密度為生物分子偶聯提供了高濃度反應位點。MagStart-Streptavidin高結合載量允許減少高活性功能微粒的體積來實現實驗方案小型化，進而最大限度地減少所需試劑的體積，從而允許以更小的體積應用固定化配體。MagStart可快速磁分離（<10 秒），通過磁壓縮減少了洗滌和洗脫過程中顆粒間隙，從而提高了效率和回收率，強磁性還可防止微粒的意外丟棄而避免樣品損失。
2. 結合和洗脫流程
影響生物素化生物分子結合的因素包括緩沖液成分、pH 值以及污染物/干擾化合物的存在。雖然大分子和小分子都可固定，但生物素化分子的大小可能會影響整體結合能力。因此，可能需要根據您的應用優化所需的磁珠數量。如果磁珠中的生物素化分子達到飽和，則下游應用可獲得最佳效果。生物素化分子的結合效率可通過比較偶聯反應前后溶液中的分子濃度來確定。MagStart-Streptavidin磁珠與各種常用緩沖液兼容，包括 Tris、Phosphate 和 SSC（sodium saline citrate）。
注意：所有試劑均應新鮮配制并達到分析級，以確保最佳性能。下文所述的程序、方法和緩沖溶液僅作示例，并非限制。MagStart-Streptavidin與一系列常用于捕獲和/或固定生物素化分子的緩沖液兼容。可達到的純度和產量取決于配體，應優化實驗條件以確保獲得理想的結果。
質譜兼容性說明：如果要對富集的目標物進行進一步的質譜分析，請考慮在初始洗滌步驟后使用其他不含去垢劑的緩沖液，以去除可能干擾質譜分析的殘留去垢劑。這可能包括使用不含洗滌劑的初始緩沖液，然后再用揮發性無鹽緩沖液（如碳酸氫銨、甲酸銨、碳酸氫銨三乙酯）洗滌。
2.1. MagStart-Streptavidin磁珠的平衡
磁珠以10 mg/ml懸浮液（80 mM Phosphate, pH 7.5, 150 mM NaCl, 1.5 mM EDTA, 0.05% Tween? 20, 0.02% sodium azide (NaN3)）形式供應。使用前，需去除運輸溶液，并將微顆粒在結合緩沖液（e.g. 80 mM sodium phosphate, pH 7.4–8.0, 150 mM NaCl, 0.05% Tween? 20）中平衡。 按以下步驟平衡 MagStart-Streptavidin 的等分磁珠，以滿足您的要求。每個反應至少需要 10 μl 微顆粒懸浮液，以確保有合適的磁珠量，便于吸入緩沖液。
1) 通過渦旋攪拌或倒置徹底重懸磁珠。
2) 將至少 10 μl 磁珠轉移到一個新的離心管中。
3) 將離心管放在磁分離器上至澄清。
4) 用移液管吸出運輸溶液。
5) 用 200 μl 結合緩沖液洗滌/平衡磁珠。
6) 將離心管放在磁分離器上至澄清。
7) 用移液管吸出結合緩沖液，重復步驟 5 和 6 兩次，共清洗三次。
8) 去除步驟 5 中的結合緩沖液后，MagStart-Streptavidin磁珠即可用于結合生物素化分子。
2.2. 生物素化寡核苷酸的固定化
1） 計算應用所需的MagStart鏈霉親和素磁珠的量，并轉移到干凈的離心管中。
2） 例如，10μl鏈霉親和素磁珠（100μg）足以結合≥300 pmol的生物素化寡核苷酸（24 mer）。
3） 將生物素化寡核苷酸添加到2.1中平衡的鏈霉親和素磁珠中。將總反應體積調整至至少100μl與結合緩沖液混合，并連續充分混合離心管。
4） 使生物素化寡核苷酸在室溫下與磁珠結合15-30分鐘。
5） 將離心管放在磁分離器上至澄清。
6） 用移液管吸取偶聯上清液。上清液可丟棄或通過差異來量化磁珠上結合的生物素化寡核苷酸量。
7） 通過分別用3×200μl結合緩沖液洗滌磁珠，從磁珠中去除任何未結合的寡核苷酸。
8） 每次清洗后，將離心管放在磁力架上至澄清。
9） 用移液管移走上清液。
10）可以丟棄來自洗滌步驟的上清液或將其與偶聯上清液合并用于定量。
2.3. 生物素化蛋白質的固定化
1） 計算固定感興趣的蛋白質所需的鏈霉親和素磁珠的量。如10μl 磁珠（100μg）足以結合約≥30μg生物素化IgG。
2） 將生物素化蛋白添加到2.1中平衡的磁珠中。用結合緩沖液將總反應體積調節至至少100μl，并連續充分混合。
3） 使生物素化的蛋白質在室溫下與磁珠結合15-30分鐘。
4） 將離心管放在磁分離器上至澄清。
5） 用移液管除去偶聯上清液。上清液可丟棄或通過差異來量化結合在磁珠上的生物素化蛋白的量。
6） 用3 × 200μl結合緩沖液洗滌，從磁珠中去除任何未結合的蛋白質。
7） 將離心管放在磁分離器上至澄清。
8） 用移液管吸取上清液。
9） 洗滌步驟的上清液可以丟棄或與偶聯上清液合并在一起進行定量。
3. 試劑適應性
MagStart-Streptavidin 磁珠相容組成如下:
Reagent
Concentration
Tween? 20
≤1%
Tris, Saline Sodium Citrate (SSC), Sodium phosphate
≤100 mM
NaCl
≤2 M
4. 常見問題
問題
可能原因
改善方法
生物素化的生物分子不會像預期的那樣與磁珠結合
反應時間不足
將反應時間擴充到至少15-30分鐘
不正確的結合pH
檢查和調整結合液pH7.5-8.0
樣品或溶液中的干擾物阻止結合
將樣品脫鹽或透析到推薦的結合液中，以去除培養基成分/其他污染物
微粒數不足
增加顆粒的數量
生物分子濃度過低
增加生物素化分子濃度
生物素化不夠
考慮目標分子未正確生物素化
生物分子的非特異吸附
離子或靜電作用導致的非特異吸附
增加結合、洗滌、洗脫緩沖液中的NaCl濃度；增加結合洗滌液中吐溫20濃度
洗滌不充分
增加洗滌次數、洗滌液體積和平衡時間
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