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貨號
規格
MS-CBX001
1 ml
MS-CBX010
10 ml
1. 產品描述
MagStart-Carboxyl 是由超多孔聚合物網絡組成的磁性聚合物微載體。通過與各種化學偶聯劑對微粒（或生物制品）進行化學活化來共價偶聯生物配體。這可以通過在單步偶聯反應中使用EDC[1-乙基-3-（3-二甲基氨基丙基）碳二亞胺]和N-羥基琥珀酰亞胺（NHS或Sulfo-NHS）試劑的水性碳二亞胺介導的活化過程來實現，或在兩步反應中，在微粒上的羧基殘基活化后加入含胺分子。MagStart微球技術的進步使生物分子可在整個微粒空間滲透和結合，為生物分子的固定化提供了極高的結合能力。可替代MagReSyn?-Carboxyl的使用。
MagStart-Carboxyl微粒極高的官能團密度為生物分子偶聯提供了高濃度的反應位點。MagStart-Carboxyl的高結合載量允許減少高活性功能微粒的體積來實現實驗方案小型化，進而最大限度地減少所需試劑的體積，從而允許以更小的體積應用固定化配體。MagStart可快速磁分離（<10 秒），通過磁壓縮減少了洗滌和洗脫過程中顆粒間隙，從而提高了效率和回收率，強磁性還可防止微粒的意外丟棄而避免樣品損失。
Product Specifications
Description
Iron oxide-containing magnetic polymer microspheres
Application
Immobilization of proteins, peptides, enzymes, antibodies and other ligands
Matrix
Proprietary polymer
Core
Iron (II, III) oxide (Magnetite)
Functional group
Carboxylic acid (COOH)
Binding capacity
≥20 mg/ml (BSA)
Particle Size
~5–10 μm
Formulation
20 mg/ml suspension in 20% ethanol
Stability
pH 3.5~10, 4~60 ℃
Storage
Store at 4~8?C until expiry date on label. DO NOT FREEZE!
注意：不當儲存、微粒干燥、細菌污染或離心回收可能導致容量/性能的不可逆損失。使用前應充分混勻。
2. 偶聯流程
2.1. 樣品制備
偶聯緩沖液的離子強度和pH值是有效固定化配體的重要考慮因素。偶聯緩沖液應不含伯胺類化合物（例如Tris）。請仔細閱讀說明指南，以確保您使用的是合適的耦合緩沖器。如果要偶聯的樣品中含有可能干擾偶聯反應的污染物，如鹽、糖、穩定劑或化合物，則應通過脫鹽、超濾或類似技術從樣品中去除這些成分。NHS-EDC活化羧基微粒的偶聯效率取決于配體濃度，可能需要優化才能達到預期的結果。
注意：所有試劑都應是新鮮制備的，并具有分析級，以確保最佳性能。下面描述的程序、方法、緩沖溶液和配體僅供參考，并非旨在限制。MagStart-Amine與一系列不同的配體固定緩沖液兼容。偶聯量取決于配體，應優化條件以確保獲得預期結果。
2.2. MagStart-Carboxyl的平衡
MagStart-Carboxy以 20 mg/ml懸液形式保存于20% 乙醇中。使用前需去除運輸溶液，并在結合液中平衡微球。推薦的方案可按比例放大或縮小以滿足要求。當前方案約結合 ~1 mg 蛋白質。
1）渦旋混合3秒徹底重懸羧基磁珠以確保均勻。
2）將 50 μl （1 mg） MagStart-Carboxyl羧基磁珠轉移到新離心管中。
3）磁分離，磁顆粒附著在離心管壁。
4）用移液槍吸棄上清。
5）在200μl用于配體偶聯的緩沖液（例如活化緩沖液，0.1M MES第2.3節）中洗滌/平衡微球，等待1分鐘進行平衡。
6）將離心管放在磁力架上，將管子與磁力架一起倒置兩次，以收集蓋子中殘留的任何磁微粒。
7）用移液管抽吸除結合緩沖液，重復步驟5和6兩次，共洗滌三次。
8）從步驟6中取出緩沖液后，MagStart-Carboxyl羧基磁珠即可進行活化以進行配體結合。
2.3. 用EDC和NHS活化MagStart-Carboxyl
1-乙基-3-[3-二甲氨基丙基]碳二亞胺鹽酸鹽（EDC） 是一種水溶性偶聯劑，可用于活化微粒上存在的羧基，N-羥基琥珀酰亞胺活化（NHS）可以協助該活化過程，以提供能夠與蛋白質等上存在的伯胺反應的中間酯：
1）根據您的固定要求準備足夠的活化液。活化溶液含有：20 mM EDC 和 50 mM NHS 在合適的緩沖液中，例如 0.1 M MES、0.5 M NaCl、pH 6.0。示例：將 28.8 mg NHS 和 19.1 mg EDC 溶解在 5 ml 緩沖液中。使用前確保 EDC 和 NHS 完全溶解。
2）將0.5ml活化液加入到按2.2制備的1mg平衡好的磁性微球中。
3）在室溫下振蕩磁性微球懸浮液15分鐘。
4）磁分離，移液槍吸出上清液并丟棄。
5）用1ml固定化緩沖液洗滌微球三次，例如PBS，pH 7.0。在每次洗滌程序之間留出 10 秒的平衡時間。
2.4蛋白質偶聯程序
注意：如果用于固定的蛋白質含量較低，則可能會發生顆粒聚集。如果您沒有足夠的蛋白質與磁珠偶聯，則可以將載體蛋白（如 BSA 或酪蛋白）與目標蛋白混合，以提供足夠的含量以避免聚集。
1）在合適的偶聯緩沖液（不含伯胺，例如PBS，pH 7.0）中配制要偶聯的蛋白質，并添加到磁性微球懸浮液中。
2）使用倒置混勻器在室溫下反應2-24小時，或溫度敏感的配體在4°C下反應。
3）將離心管放在磁力架上。
4）通過移液器吸取上清，丟棄或保留以備后續測定偶聯效率。
5）僅用200μl偶聯緩沖液洗滌兩次（洗滌之間平衡1分鐘）。磁分離，吸棄上清。
6）加入500μl過量含胺封閉劑的合適緩沖液（例如，200mM乙醇胺或天冬氨酸，PBS，pH 7.0），并在室溫下孵育3小時（或在4?C下孵育12+小時）以淬滅微球上任何剩余的胺反應性殘留物。
7）磁分離吸棄多余的淬火劑。
8）可選：用含有 0.5–1 M NaCl 的 500 μl 合適緩沖溶液洗滌 3 次，以去除可能的非共價結合蛋白質和非反應物。磁分離回收微球并吸出洗滌液。
9）在合適體積的緩沖液中洗滌/平衡含有固定化配體的微粒，以備進一步應用或儲存。微粒現在已準備好用于您的下游實驗。
10）固定化生物制品可與合適的防腐劑（例如含有0.05%疊氮化鈉的磷酸鈉緩沖液）一起儲存4°C。不要冷凍微球。
3. 常見問題
問題
可能原因
改善方法
配體不與微粒結合
活化液不穩定
使用新制備活化液
不正確的結合pH
確保活化pH 5-6.5之間
校準pH計
蛋白質降解
添加蛋白酶抑制劑或新配蛋白溶液
樣品或溶液中的干擾物阻止結合
確保緩沖液不含伯胺，例如不使用Tris或甘氨酸緩沖液。如含則需脫鹽
微粒數量不足
增加顆粒的數量
蛋白質/配體含量過低
使用濃度更高的配體溶液，將總蛋白濃度增加到2~10 mg/ml
參考文獻：
1. Dutt M, Duong M N, Bringans S, et al. Semi-Automated Lectin Magnetic Bead Array (LeMBA) for Translational Serum Glycoprotein Biomarker Discovery and Validation[M]//Serum/Plasma Proteomics: Methods and Protocols. New York, NY: Springer US, 2023: 395-411.
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