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預期用途
PuriMagTM HIC8富集試劑盒（基于磁珠的疏水相互作用色譜法）是為在 MALDI-TOF 質譜分析之前基于疏水相互作用從生物樣品中富集蛋白質和肽而開發的。
產品信息
PuriMagTM HIC8：10 mg/ml×1ml，存儲于 20%乙醇溶液中。 產品應小心儲存和處理，以避免污染。
產品在常溫下運輸。我們建議到貨后將試劑盒存放在 2 - 8°C 環境中。請勿冷凍！
HIC8 緩沖液
Binding buffer (BB): 0.1% trifluoroacetic acid (TFA), NaCl up to 200 mM can be added using HIC8 beads;
Washing buffer (WB): 0.1% trifluoroacetic acid (TFA);
Elution buffer (EB)：Typically 50% ACN in 0.1% TFA.
Note: Fractionation of proteins/peptides is possible by using different concentrations of ACN (e.g. 20%, 50%, 80%)
推薦的生物標志物富集程序
通常，我們推薦以下樣品制備方案，但根據樣品的種類和應用，可能需要調整此方案。為此，可以改變不同的參數（例如，使用的磁珠量、樣品和結合溶液的體積）。
注意：在開始樣品制備之前，洗脫緩沖液必須每天新配。對于標準分析實驗，建議使用50%乙腈。因此，使用穩定緩沖液稀釋 100% 乙腈。
注意：使用穩定緩沖液可顯著提高靶標上樣品制備的穩定性及采集的譜圖質量。由于其穩健性，強烈建議將其用于今后診斷應用。但請注意，在乙腈混合物中用穩定緩沖液代替去離子水會略微改變獲得的質譜，從而改變與先前研究相比的重現性。為繼續已經開始的研究，使用在去離子水中稀釋的50%乙腈。
結合樣本到磁珠
1. 從上到下小心搖晃（但不要渦旋或旋轉！）磁珠至少 20 次，然后反轉以獲得均勻的懸浮液。必要時在移液步驟之間重復搖動。
2. 將10 μL 結合緩沖液和最多含有 500 pmol 蛋白的 5μL 樣品（例如人血清）轉移到標準薄壁 PCR 管中。加入10-20 μL磁珠，上下移液5次，仔細混合溶液。等待1分鐘。
注意：必須根據不同的示例進行修改（見下文）
10 μL BB
5 μL Sample
10-20 μL Beads
3.將試管放入磁分離架，等待20秒，將珠子與上清液分離。注意磁珠在管中的運動。
4.使用移液管小心地取出上清液。避免移液器吸頭與磁珠接觸，并注意不要取出磁珠。
5. 將試管從磁分離架移開。
洗滌結合到磁珠上的樣本
6. 洗滌時，加入 100 μL 洗滌緩沖液。
100 μL WB
7. 將試管放入磁力架，并在相鄰孔之間來回移動試管 20 次。
8. 等待20秒，在管壁上收集磁珠，然后用移液管小心地取出上清液。
9. 重復步驟 6.-8.兩次。
從磁珠上洗脫樣本
10. 為了洗脫結合的肽和蛋白質，加入 10 μL 洗脫緩沖液（例如，50% 乙腈或 50% 乙腈的穩定緩沖液）并充分混合。等待 1 分鐘。
10 μL EB
11. 將試管放入磁力架，等待 30 秒，將磁珠與洗脫緩沖液分離。
12. 將含有純化肽/蛋白的洗脫緩沖液轉移到新試管中。
13. 繼續使用如下所述的適當MALDI-TOF靶標制備方案或適當方法儲存樣品。
應用文獻：
1. Mathias Bruegel, Mathis Planert, Sven Baumann, Almut Focke, Florian Then Bergh, Alexander Leichtle, Uta Ceglarek, Joachim Thiery, Georg Martin Fiedler, Standardized peptidome profiling of human cerebrospinal fluid by magnetic bead separation and matrix-assisted laser desorption/ionization time-of-flight mass spectrometry, Journal of Proteomics, Volume 72, Issue 4, 2009, Pages 608-615, ISSN 1874-3919, https://doi.org/10.1016/j.jprot.2008.11.018. 2. Katrin Sparbier, Thomas Wenzel, Markus Kostrzewa, Exploring the binding profiles of ConA, boronic acid and WGA by MALDI-TOF/TOF MS and magnetic particles, Journal of Chromatography B, Volume 840, Issue 1, 2006, Pages 29-36, https://doi.org/10.1016/j.jchromb.2006.06.028.
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