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一、概述
環氧基磁珠PuriMag G-Epoxy是在Fe3O4磁核表面包覆GMA涂層的超順磁納米顆粒，表面具有高密度環氧基團。環氧基磁珠可用于共價偶聯胺、巰基或含羥基的配體。含羥基、胺和巰基的配體的偶聯分別在pH 11-13、pH> 9和pH 7.5~8.5下反應。不溶于水的配體可在50％有機溶劑（二甲基甲酰胺）中偶聯。PuriMag G-Epoxy包含短臂和長臂磁珠，都適用于蛋白質和多肽的偶聯。
w 優點：
w 預活化可隨時可用；
w 可在pH 9?12，20?40 °C，6?24 h條件下高效共價偶聯；
w 配體通過共價鍵穩定偶聯，不會脫落；
w 較低的非特異性結合；
w 每克磁珠可固定0.4~4 mg蛋白質或0.04~0.4 mg肽；
w 應用：細胞分選、免疫共沉淀；抗體、蛋白質/肽的純化，DNA / RNA
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二、產品特性
1. 短鏈環氧基磁珠PuriMag GS-Epoxy
(Epoxy Density>600μmol/g)
2. 長鏈環氧基磁珠PuriMag GL-Epoxy
(Epoxy Density>300μmol/g)
穩定性： pH 4-10, Temperature of 4℃-90℃, Most organic solvents;
磁性: ~60-80 emu/g;
數量: ~4×1010 beads /mg; 密度: 3.5 g/ml
尺寸: ~ 200nm diameter; 比表面積: ~5 m2/g;
儲存：10 mg/ml in acetone at 2~8°C
三、偶聯方案
環氧基磁珠PuriMag G-Epoxy有利于小配體與磁珠的結合，包括但不限于單糖、肽和二糖。 它也可用于偶聯各種配體，如蛋白A、StrepTactin、枯草桿菌蛋白酶和免疫球蛋白。 如果配體負載量太低，可能會導致非特異性吸附過大；如果配體負載量過高，可能會造成空間位阻。因此，強烈建議優化每個單獨應用的磁珠用量。推薦用量一般為0.04~0.4 mg多肽/ mg磁珠。 以下實驗方案可相應放大和縮小。
A. 緩沖液
1) 偶聯緩沖液（Coupling Buffer）: 0.1 M sodium carbonate buffer or 0.1 M sodium phosphate, pH 8.5-10;
注意：緩沖液的離子強度對于獲得更高的偶聯效率至關重要。 偶聯緩沖液應具有最小的離子強度，并且不應含有任何氨基（例如Tris）、硫醇、羥基和酚。但洗滌或儲存緩沖液可含有氨基、硫醇、羥基和酚基團。
2) 封閉緩沖液（Blocking Buffer）: 1 M ethanolamine， pH 9.0;
3) 洗滌緩沖液（Wash buffer）: PBS, pH 7.4.;
B. 偶聯方法
注意：將環氧基磁珠按10mg/ml懸浮在50％丙酮中，劇烈渦旋分散磁珠并儲存在4 ℃。使用前混勻磁珠。
1. 將10mg磁珠轉移至EP管中。
2. 將EP管置于磁磁力架上1min，吸棄上清液，用1ml偶聯緩沖液重新懸浮磁珠。
3. 重復步驟2三次。
注意：一旦水化，應盡快使用磁珠。
4. 將適量的蛋白質或肽溶解在1ml偶聯緩沖液中。
注意：環氧基活化磁珠的偶聯效率因配體而異。用戶應根據經驗優化配體的濃度。推薦1-10 mg/ml用于蛋白質結合；對于小肽，配體濃度應超過200 umol/ml。
5. 將蛋白質溶液加入洗過的磁珠中，重懸磁珠并孵育。
注意：胺類配體如蛋白質在25 ℃下偶聯15~48 h。但是，如果配體對溫度非常敏感，可在4℃下偶聯至少48~72 h。肽、含羥基的配體例如碳水化合物或含巰基的配體在25~75 ℃下偶聯4~15 h。
6. 用1ml PBS緩沖液洗磁珠3次。
7. 將0.5~1ml封閉緩沖液添加至磁珠中，并在4℃下孵育至少4h或過夜。
8. 用1ml PBS緩沖液洗磁珠4-6次。
9. 用PBS緩沖液（0.1％疊氮化物）將磁珠重懸至所需濃度，儲存于2~8 ℃并避免凍結。
C. 偶聯效率的優化
C-1．配體用量優化
在特定配體濃度以下，緩沖液中配體的量與環氧基磁珠的偶聯量成正比；當配體濃度達到一定濃度后，配體偶聯效率通常會逐漸減小。通常1~10 mg配體/ g磁珠是研究最佳配體濃度的范圍。
C-2．偶聯用緩沖液與pH值
為了有效控制pH值，建議使用10 mM的最小緩沖液強度。 合適的緩沖液包括碳酸鹽、硼酸鹽和磷酸鹽；不要使用包含Tris、甘氨酸或其他親核試劑等組成的緩沖液。 環氧基磁珠在pH 9?13下較易與配體偶聯，偶聯pH的選擇通常受到配體在堿性緩沖液中穩定性的限制。環氧基團在較高pH下與配體反應更快，然而高的pH同樣促進了環氧基團的競爭性水解反應。偶聯含羥基的配體大約pH?13。
C-3．偶聯溫度和時間
大多數應用推薦在?20°C過夜偶聯配體。 若在選定溫度下配體穩定，則可在較高溫度下進行偶聯，最高可達40°C，通常反應更快。 若偶聯緩沖液pH和反應溫度都高，則偶聯時間需縮短。應避免延長偶聯反應時間可能導致的配體降解。
C-4．剩余活性基團的封閉與洗滌
偶聯后殘留在磁珠上的活性基團需被封閉以避免與感興趣的蛋白質發生不希望的反應。 使用1M乙醇胺在pH 8-9進行封閉反應4h。封閉完成后需要使用偶聯緩沖液徹底洗滌磁珠以除去過量配體。對通過離子相互作用被捕獲在樹脂上少量配體，建議交替使用酸性緩沖液（100mM乙酸鹽，500mM NaCl，pH4.0）和堿性緩沖液（100mM磷酸鹽，500mM NaCl，pH8.0）洗滌。
本公司還提供二氧化硅包覆修飾的環氧基磁珠，請參考 http://www.posuichina.com/Product/5730985239.html
客戶發表論文：
1. Zhang M, Luo M, Chen G, et al. A novel Affi-Cova magnetic nanoparticles for one-step covalent immobilization of His-tagged enzyme directly from crude cell lysate[J]. International Journal of Biological Macromolecules, 2024: 135811.
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