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實驗常用試劑、緩沖液的標準配制方法

2019-6-11 22:34:27點擊:


11M Tris-HCl            □組份濃度1 MTris-HCl
(pH7.4,7.6,8.0)   □配制量1L
    □配置方法 1. 稱量121.1gTris置于1L燒杯中。
                         2. 加入約800mL的去離子水,充分攪拌溶解。
                         3. 按下表量加入濃鹽酸調節所需要的pH值。
                                                        pH值                      濃HCl 
                                                        7.4                         約70mL
                                                        7.6                         約60mL
                                                        8.0                         約42mL
                        4. 將溶解定容至1L。 
                       5. 高溫高壓滅菌后,室溫保存。                           

注意:應使溶液冷卻至室溫后再調定pH值,因為Tris溶液的pH值隨溫度的變化差很大,溫度每升高1℃,溶液的pH值大約降低0.03個單位。 


21.5 MTris-HCl    □組份濃度1.5 MTris-HCl
    (pH8.8)            □配制量1L
        □配置方法 1.稱取181.7gTris置于1L燒杯中。
                           2. 加入約800mL的去離子水,充分攪拌溶解。
                           3. 用濃鹽酸調pH值至8.8。
                            4. 將溶液定容至1L。
                          5. 高溫高壓滅菌后,室溫保存。 
       注意:應使溶液冷卻至室溫后再調定pH值,因為Tris溶液的pH值隨溫度的變化差異很大,溫度每升高1℃,溶液的pH值大約降低0.03個單位。 


310×TE Buffer        □組份濃度100 mMTris-HCl,10 mMEDTA
(pH 7.4,7.6,8.0)  □配制量1L
 □配置方法 1. 量取下列溶液,置于1L燒杯中。
                              1 MTris-HCl Buffer(pH7.4,7.6,8.0) 100mL
                            500 mMEDTA(pH8.0) 20mL
                      2. 向燒杯中加入約800mL的去離子水,均勻混合。
                     3. 將溶液定至1L后,高溫高壓滅菌。
                     4. 室溫保存。 


4
3 M 醋酸鈉     □組份濃度3 M醋酸鈉
    (pH5.2)          □配制量 100mL
    □配置方法 1. 稱取40.8gNaOAc?3H2O置于100~200mL燒杯中,加入約40mL的去離子水攪拌溶解。
                          2. 加入冰乙酸調節pH值至5.2。
                        3. 加入去離子水將溶液定容至100mL。
                         4. 高溫高壓滅菌后,室溫保存。 


5
PBS Buffer          □組份濃度137 mMNaCl,2.7mMKCl,10 mMNa2HPO4,2 mMKH2PO4
                                □配制量1L

□配置方法 1. 稱量下列試劑,置于1L燒杯中。
                                                      NaCl                     8 g
                                                      KCl                     0.2g
                                                      Na2HPO4          1.42 g
                                                      KH2PO4             0.27g
       2. 向燒杯中加入約800 mL的去離子水,充分攪拌溶解。
      3. 滴加HCl將pH值調節至7.4,然后加入去離子水將溶液定容至1L。 
       4. 高溫高壓滅菌后,室溫保存。
       注意:上述PBS Buffer中無二價陽離子,如需要,可在配方中補充1mMCaCl2和0.5 mMMgCl2。 


6
10 M醋酸銨         □組份濃度10 M醋酸銨
                                □配制量 100mL
   □配置方法 1. 稱量77.1g醋酸銨置于100~200 mL燒杯中,加入約30 mL的去離子水攪拌溶解。
                        2.加去離子水將溶液定容至100mL。
                          3.使用0.22μm濾膜過濾除菌。
                         4.密封瓶口于室溫保存。 
       注意:醋酸銨受熱易分解,所以不能高溫高壓滅菌。 


7
Tris- HCl平衡苯酚    □配置方法

       1. 使用原料:大多數市售液化苯酚是清亮無色的,無需重蒸餾便可用于分子生物學實驗。但有些液化苯酚呈粉紅色或黃色,應避免使用。同時也應避免使用結晶苯酚,結晶苯酚必須在160℃對其進行重蒸餾除去諸如醌等氧化產物,這些氧化產物可引起磷酸二酯鍵的斷裂或導致RNA和DNA的交聯等。因此,苯酚的質量對DNA、RNA的提取極為重要,我們推薦使用高質量的苯酚進行分子生物學實驗。  
       2. 操作注意:苯酚腐蝕性極強,并可引起嚴重灼傷,操作時應戴手套及防護鏡等。所有操作均應在通風櫥中進行,與苯酚接觸過的皮膚部位應用大量水清洗,并用肥皂和水洗滌,忌用乙醇。 
       3. 苯酚平衡:因為在酸性pH條件下DNA分配于有機相,因此使用苯酚前必須對苯酚進行平衡使其pH值達到7.8以上,苯酚平衡操作方法如下: 
          ① 液化苯酚應貯存于-20℃,此時的苯酚呈現結晶狀態。從冰柜中取出的苯酚首先在室溫下放置使其達到室溫,然后在68℃水浴中使苯酚充分溶解。 
          ② 加入羥基喹啉(8-Quinolinol)至終濃度0.1%。該化合物是一種還原劑、RNA酶的不完全抑制劑及金屬離子的弱螯合劑,同時因其呈黃色。有助于方便識別有機相。 
          ③ 加入等體積的1MTris-HCl(pH8.0),使用磁力攪拌器攪拌15分鐘,靜置使其充分分層后,除去上層水相。  
          ④ 重復操作步驟③。 
          ⑤ 加入等體積的0.1MTris-HCl(pH8.0),使用磁力攪拌器攪拌15分鐘,靜置使其充分分層后,除去上層水相。  
          ⑥ 重復操作步驟⑤,稍微殘留部分上層水相。 
          ⑦ 使用pH試紙確認有機相的pH值大于7.8。 
          ⑧ 將苯酚置于棕色玻璃瓶中4℃避光保存。

8、苯酚/氯仿/異戊醇  □配置方法

        1. 說明:從核酸樣品中除去蛋白質時常常使用苯/酚/氯仿/異戊醇(25:24:1)。氯仿可使蛋白(25 :24 :1) 質變性并有助于液相與有機相的分離,而異戊醇則有助于消除抽提過程中出現的氣泡。 
        2. 配置方法:將Tris-HCl平衡苯酚與等體積的氯仿/異戊醇(24:1)均勻混合后,移入棕色玻璃瓶中4℃保存。 

910%(W/VSDS   □組份濃度 10%(W/V)SDS
                                   □配制量 100mL
    □配置方法 1.稱量10g高純度的SDS置于100~200mL燒杯中,加入約80mL的去離子水,68℃加熱溶解。
                        2. 滴加數滴濃鹽酸調節pH值至7.2。
                           3. 將溶液定容至100mL后,室溫保存。 


10
2 N NaOH           □組份濃度 2N NaOH
                                 □配制量 100mL 
    □配置方法

1.量取80mL去離子水置于100~200mL塑料燒杯中(NaOH溶解過程中大量放熱,有可能使玻璃燒杯炸裂)。 
      2. 稱取8gNaOH小心地逐漸加入到燒杯中,邊加邊攪拌。
     3. 待NaOH完全溶解后,用去離子水將溶液體積定容至100mL。
     4. 將溶液轉移至塑料容器中后,室溫保存。 


11
2.5 N HCl         □組份濃度 2.5 N HCl
                                  □配制量 100mL
    □配置方法 1. 在78.4mL的去離子水中加入21.6mL的濃鹽酸(11.6N),均勻混合。
                        2. 室溫保存。 


12
5 M NaCl         □組份濃度5 MNaCl
                                 □配制量1L
  □配置方法 1. 稱取292.2gNaCl置于1L燒杯中,加入約800mL的去離子水后攪拌溶解。
                    2. 加去離子水將溶液定容至1L后,適量分成小份。
                    3. 高溫高壓滅菌后,4℃保存。 


13
20%(W/VGlucose     □組份濃度 20%(W/V)Glucose 
                                             □配制量 100mL 
 □配置方法 1. 稱取20gGlucose置于100~200mL燒杯中,加入約80mL的去離子水后,攪拌溶解。
                    2. 加去離子水將溶液定容至100mL。
                     3. 高溫高壓滅菌后,4℃保存。 


14
Solution I            □組份濃度25 mMTris-HCl(pH8.0),10mMEDTA,50mMGlucose
(質粒提取用)        □配制量1L
    □配置方法 1. 量取下列溶液,置于1L燒杯中。
            1MTris-HCl(pH8.0)             25mL
                           0.5 MEDTA(pH8.0)            20mL 
                           20%Glucose(1.11M)           45mL
                              dH2O                                    910mL
                          2. 高溫高壓滅菌后,4℃保存。
                          3. 使用前每50 mL的Soliution I中加入2mL的RNase A(20mg/mL)。 


15
Solution II           □組份濃度250mMNaOH,1%(W/V)SDS
(質粒提取用)            □配制量 500mL
   □配置方法 1. 量取下列溶液置于500mL燒杯中。
                                                        10%SDS                        50mL
                                                         2N NaOH                       50mL 
                      2. 加滅菌水定容至500mL,充分混勻。
                      3. 室溫保存。此溶液保存時間最好不要超過一個月。 
                        注意:SDS易產生氣泡,不要劇烈攪拌。

16Solution III          □組份濃度3MKOAc,5MCH3COOH
(質粒提取用)           □配制量 500mL
 □配置方法 1. 量取下列溶液置于500mL燒杯中。
                                                        KOAc                           147g
                                                        CH3COOH                    57.5mL 
                      2. 加入300mL去離子水后攪拌溶解。
                      3. 加去離子水將溶液定容至500mL。 
                       4. 高溫高壓滅菌后,4℃保存。 


17
0.5M EDTA            □組份濃度0.5 MEDTA
       (pH8.0)                  □配制量1L
     □配置方法 1. 稱取186.1gNa2EDTA?2H2O,置于1L燒杯中。
                          2. 加入約800mL的去離子水,充分攪拌。
                          3. 用NaOH調節pH值值8.0(約20gNaOH)。 
                                  注意:pH值至8.0時,EDTA才能完全溶解。
                          4. 加去離子水將溶液定容至1L。
                          5. 適量分成小份后,高溫高壓滅菌。
                           6. 室溫保存。 


18
1 M DTT          □組份濃度1 MDTT
                                  □配制量 20mL
          □配置方法 1. 稱取3.09gDTT,加入到50mL塑料離心管內。
                             2. 加20mL的0.01 M的NaOAc(pH5.2),溶解后使用0.22μm濾器過濾除菌。
                             3. 適量分成小份后,-20℃保存。 


19
10mM ATP            □組份濃度10mMATP
                                    □配制量 20mL
□配置方法 1. 稱取121mg Na2ATP?3H2O,加入到50mL塑料離心管內。
                    2. 加20mL的25mMTris-HCl(pH8.0),攪拌溶解。
                   3. 適量分成小份,-20℃保存。


分子生物學實驗常用培養基的配制方法

1Ampicillin             □組份濃度 100mg/ml Ampicillin
(100mg/ml)              □配制量 50mL
 □配置方法 1. 稱量5gAmpicillin置于50mL離心管中。
                       2. 加入40mL滅菌水,充分混合溶解后,定容至50mL。
                       3. 用0.22μm濾膜過濾除菌。
                       4. 小份分裝(1mL/份)后,-20℃保存。 


2
IPTG                    □組份濃度 24mg/mL IPTG
(24mg/mL)             □配制量 50mL
     配置方法 1. 稱量1.2gIPTG置于50mL離心管中。
                      2. 加入40mL滅菌水,充分混合溶解后,定容至50mL。
                     3. 用0.22μm濾膜過濾除菌。 
                     4. 小份分裝(1mL/份)后,-20℃保存。 


3
X- Gal                  □組份濃度 20mg/mL X- Gal
(20mg/mL)             □配制量 50mL
          □配置方法 1. 稱取1gX-Gal置于50mL離心管中。
                             2. 加入40mL DMF(二甲基甲酰胺),充分混合溶解后,定容至50mL。
                           3. 小份分裝(1mL/份)后,-20℃保存。 


4LB培養基              □組份濃度 1%(W/V)Tryptone,0.5%(W/V)Yeast Extract,1%(W/V)NaCl
                                  □配制量1L
       □配置方法 1. 稱量下列試劑,置于1L燒杯中
                                                        Tryptone                          10g
                                                         Yeast Extract                   5g 
                                                         NaCl                              10g
                            2. 加入約800mL的去離子水,充分攪拌溶解。
                           3. 滴加5N NaOH(約0.2mL),調節pH值至7.0。
                            4. 高溫高壓滅菌后,4℃保存。 


5
LB/Amp培養基     □組份濃度  1%(W/V)        Tryptone
                                                     0.5%(W/V)     Yeast Extract
                                                     1%(W/V)        NaCl
                                                     0.1mg/mL            Ampicillin
                                 □配制量1L
        □配置方法 1. 稱量下列試劑,置于1L燒杯中
                                                       Tryptone                     10g
                                                       Yeast Extract                5g
                                                       NaCl                           10g
                              2. 加入約800mL的去離子水,充分攪拌溶解。
                          3. 滴加5N NaOH(約0.2mL),調節pH值至7.0。
                            4. 加去離子水將培養基定容至1L。 
                          5. 高溫高壓滅菌后,冷卻至室溫。
                           6. 加入1mL Ampicillin(100mg/mL)后均勻混合。
                                                    7.4保存。 


6TB培養基             □組份濃度     1.2%(W/V)       Tryptone
                                                       2.4%(W/V)      Yeast Extract
                                                       0.4%(V/V)        Glycerol 
                                                       17mM                   KH2PO4
                                                      72mM                   K2HPO4 
                                  □配制量1L
      □配置方法 1. 配制磷酸鹽緩沖液(0.17MKH2PO4,0.72MK2HPO4)100mL。
                           2.稱取下列試劑,置于1L燒杯中。
                                                       Tryptone                          12g 
                                                       Yeast Extract                    24g
                                                       Glycerol                              4mL 
                   3. 加入約800mL的去離子水,充分攪拌溶解。
                  4. 加去離子水將培養基定容至1L后,高溫高壓滅菌。
                  5. 待溶液冷卻至60℃以下時,加入100mL的上述滅菌磷酸鹽緩沖液。
                 6.4保存。 


7
TB/Apm培養基    □組份濃度 1.2%(W/V)    Tryptone 
                                                  2.4%(W/V)    Yeast Extract
                                                  0.4%(V/V)      Glycerol
                                                  17mM                 KH2PO4
                                                 72mM                 K2HPO4
                                                  0.1mg/mL           Ampicillin 
                                 □配制量1L
□配置方法

1. 配制磷酸鹽緩沖液(0.17MKH2PO4,0.72MK2HPO4)100mL。溶解2.31gKH2PO4和2.54gK2HPO4于90mL的去離子水中,攪拌溶解后,加去離子水定容至100mL,高溫高壓滅菌。 
2. 稱取下列試劑,置于1L燒杯中。
                                                      Tryptone                        12g
                                                      Yeast Extract                 24g 
                                                      Glycerol                           4mL
3. 加入約800mL的去離子水,充分攪拌溶解。
4. 加去離子水將培養基定容至1L后,高溫高壓滅菌。

 5. 待溶液冷卻至60℃以下時,加入100mL的上述滅菌磷酸鹽緩沖液和1mL Ampicillin(100mg/mL)。
 6. 均勻混合后4℃保存。 


8
SOB培養基         □組份濃度 2%(W/V)       Tryptone
                                                  0.5%(W/V)    Yeast Extract
                                                  0.05%(W /V) NaCl
                                                 2.5mM               KCl
                                                10mM                 MgCl2 
                                □配制量1L
   □配置方法

1. 配制250mMKCl溶液。 在90mL的去離子水中溶解1.86gKCl后,定容至100mL。
2. 配制2MMgCl2溶液。在90mL的去離子水中溶解19gMgCl2后,定容至100mL,高溫高壓滅菌。

3. 稱取下列試劑,置于1L燒杯中。 
                                                     Tryptone                       20g
                                                     Yeast Extract                 5g
                                                     NaCl                            0.5g
4. 加入約800mL的去離子水,充分攪拌溶解。

5 量取10mL250 mMKCl溶液,加入到燒杯中。 
6. 滴加5N NaOH溶液(約0.2mL),調節pH值至7.0。
7. 加入去離子水將培養基定容至1L。
8. 高溫高壓滅菌后,4℃保存。
    9. 使用前加入5mL滅菌的2MMgCl2溶液。 


9
SOC培養基         □組份濃度    2%(W/V)          Tryptone
                                                    0.5%(W/V)             Yeast Extract
                                                    0.05%(W /V)          NaCl 
                                                    2.5mM                          KCl
                                                   10mM                           MgCl2
                                                   20mM                           葡萄糖
                               □配制量 100mL
 □配置方法

1. 配制1M葡萄糖溶液。將18g葡萄糖溶于90mL去離子水中,充分溶解后定容至100mL,用0.22μm濾膜過濾除菌。
2. 向100mL SOB培養基中加入除菌的1M葡萄糖溶液2mL,均勻混合。

3.4保存。 


10
2×YT培養基    □組份濃度 1.6%(W/V)Tryptone, 1%(W/V)Yeast Extract,0.5%(W/V)NaCl
                               □配制量1L
  □配置方法 1.稱取下列試劑,置于1L燒杯中。
                                                    Tryptone                         16g
                                                    Yeast Extract                   10g 
                                                    NaCl                                 5g
                       2. 加入約800mL的去離子水,充分攪拌溶解。
                       3. 滴加1N KOH,調節pH值至7.0。
                       4. .加水離子水將培養基定容至1L。
                       5. 高溫高壓后,4℃保存。 


11
Φb×broth培養基 □組份濃度 2%(W/V)Tryptone, 0.5%(W/V)Yeast Extract,0.5%(W/V)MgSO4?7H2O
                                    □配制量1L 
        □配置方法 1.稱取下列試劑,置于1L燒杯中。
                                                         Tryptone                     20g
                                                         Yeast Extract               5g
                                                         MgSO4?7H2O                5g 
                       2. 加入約800mL的去離子水,充分攪拌溶解。            

3. 滴加1N KOH,調節pH值至7.5。
                        4. .加水離子水將培養基定容至1L。
                       5. 高溫高壓后,4℃保存。 


12
NZCYM培養基  □組份濃度    0.5%(W/V)        Yeast Extract
                                                    0.1%(W/V)        Casamino Acid
                                                   1%(W /V)           NZ胺
                                                   0.5%(W /V)        NaCl 
                                                   0.2%(W /V)        MgSO4?7H2O
                               □配制量1L
           □配置方法 1.稱取下列試劑,置于1L燒杯中。
                                                    Yeast Extract                 5g 
                                                    Casamino Acid               1g
                                                    NZ胺                           10g
                                                    NaCl                             5g
                                                    MgSO4?7H2O                 2g
                    2. 加入約800mL的去離子水,充分攪拌溶解。
                  3. 滴加5N NaOH溶液(約0.2mL),調節pH值至7.0。
                  4. .加水離子水將培養基定容至1L。
                  5. 高溫高壓后,4℃保存。 


13
NZYM培養基      □組份濃度     0.5%(W/V)        Yeast Extract
                                                     1%(W /V)             NZ胺
                                                     0.5%(W /V)           NaCl
                                                     0.2%(W /V)           MgSO4?7H2O 
 □配置方法 NZYM培養基除不含Casamino Acid(酪蛋白氨基酸)外,其他成份與NZCYM培養基相同。 


14
NZM培養基       □組份濃度     1%(W /V)       NZ胺
                                                     0.5%(W /V)           NaCl
                                                     0.2%(W /V)           MgSO4?7H2O
□配置方法 NZM培養基除不含Yeast Extract(酵母提取物)外,其他成份與NZYM培養基相同。 


15
、一般固體培養基的  □配置方法 1. 按照液體培養基配方準備好液體培養基,在高溫高壓滅菌前,加入下列試劑中的一種。
       配制            Agar(瓊脂:鋪制平板用)             15g/L
                         Agar(瓊脂:配制頂層瓊脂用)        7g/L
                     Agarose(瓊脂糖:鋪制平板用)    15 g/L
                       Agarose(瓊脂糖:配制頂層瓊脂用)7g/L
                2. 高溫高壓滅菌后,帶上手套取出培養基,搖動容器使瓊脂或瓊脂糖充分混勻(此時培養基溫度很高,小心燙傷)。  
               3. 待培養基冷卻至50~60℃時,加入熱不穩定物質(如抗生素),搖動容器充分混勻。
              4. .鋪制平板(30~35mL培養基/90mm培養皿)。 


16
LB/Amp/X-Gal/IPTG  □組份濃度      1%(W /V)            Tryptone 
       平板培養基                      0.5%(W/V)          Yeast Extract
                                                1%(W/V)              NaCl
                                              0.1mg/mL                 Ampicillin
                                               0.5%(W /V)          IPTG
                                                0.04mg/mL                X-Gal
                                               1.5%(W /V)           Agar
                                       □配制量1L
  □配置方法 1. 稱取下列試劑,置于1L燒杯中。
                                                             Tryptone                       10g 
                                                             Yeast Extract                  5g
                                                              NaCl                           10g
                      2. 加入約800mL的去離子水,充分攪拌溶解。
                     3. 滴加5N NaOH溶液(約0.2mL),調節pH值至7.0。 
                     4. 加水離子水將培養基定容至1L后,加入15gAgar。
                    5. 高溫高壓滅菌后,冷卻至60℃左右。
                    6. 加入1mL Ampicillin(100mg/mL)、1mL IPTG(24mg/mL)、2mL X-Gal(20mg/mL)后均勻混合。 
                   7. 鋪制平板(30~35mL培養基/90mm培養基)。
                   8.4保存平板。 


17
TB/Amp/X-Gal/IPTG  □組份濃度   

 1.2%(W /V)             Tryptone
  平板培養基   2.4%(W/V)              Yeast Extract
                          0.4%(W/V)               Glycerol 
                         17mM                           KH2PO4
                       72mM                           K2HPO4
                        0.1mg/mL                     Ampicillin
                           0.024mg/mL                  IPTG 
                         0.04mg/mL                    X-Gal
                        1.5%(W /V)                Agar
   □配制量1L
  □配置方法 1.配制磷酸鹽緩沖液(0.17MKH2PO4,0.72MK2HPO4)100mL。
                       2. 稱取下列試劑,置于1L燒杯中。 
                                                              Tryptone                      12g 
                                                              Yeast Extract             24g
                                                          Glycerol                        4mL
                       3. 加入約800mL的去離子水,充分攪拌溶解。
                       4. 加水離子水將培養基定容至1L后,加入15gAgar。
                        5. 高溫高壓滅菌后,冷卻至60℃左右。
                        6. 加入100mL的上述滅菌磷酸鹽緩沖液、1mL Ampicillin(100mg/mL)、1mL IPTG(24mg/mL)、2mL X-Gal(20mg/mL)后均勻混合。 
                        7. 鋪制平板(30~35mL培養基/90mm培養基)。 
                        8.4保存平板。


生物化學實驗常用試劑的配制方法

10.5mol/L氫氧化鈉溶液 □組份濃度 0.5mol/L
                                                 □配制量     2L
             □配置方法 1.準確稱取氫氧化鈉40g。
                                   2.用去離子水溶解并稀釋至2L。 


20.5mol/L鹽酸溶液          □組份濃度   0.5mol/L
                                                 □配制量      2L
             □配置方法 1.準確量取鹽酸83.4mL。
                                 2.用去離子水稀釋至2L。


40.2%葡萄糖標準溶液      □組份濃度 0.2%
                                                  □配制量1L 
   □配置方法 1.稱取葡萄糖2.5g置于稱量瓶中,在70℃干燥2小時。
                       2.干燥器中冷卻至室溫,重復干燥,冷卻至恒重。
                        3.準確稱取葡萄糖2.000g。
                        4.用去離子水溶解并定容至1L 
                        5.于4℃保存。


5250μg/mL牛血清             □組份濃度 250μg/mL
白蛋白標準液                          □配制量2L 
   □配置方法 1.準確稱取250mg標準牛血清白蛋白。
                         2.用0.03mol/LpH7.8的磷酸緩沖液溶解并定容至1L。
                      3.4保存。


6Folin試劑甲                      

□配置方法 1.稱取10g氫氧化鈉溶于400mL去離子水中,
                                   加入50g無水碳酸鈉,溶解,待用。
                 2.稱取0.5g酒石酸鉀鈉,溶于80mL去離子水中,
                                   加入0.25g硫酸銅?5水,溶解。
                   3.將1:2:去離子水按20:4:1的比例混合即可。
                   4.4保存,可用一周。


7Folin試劑乙                      

□配置方法

1.在500mL的磨口回流裝置內加入鎢酸鈉?2水25.0359g,
          鉬酸鈉?2水6.2526g,去離子水175mL,85%磷酸12.5mL,
          濃鹽酸25mL,充分混合。
 2.回流10小時,再加硫酸鋰37.5g,去離子水12.5mL及數滴溴。
 3.然后開口沸騰15min,以驅除過量的溴,冷卻后定容到250mL。
 4.于棕色瓶中保存,可使用多年 
注意:上述制備地Folin試劑乙地貯備液濃度一般在2mol/L左 右,幾種操作方案都是把Folin試劑乙稀釋至1mol/L的 濃度作為應用液,我們這時是把貯備液于使用前稀釋18 倍,使之濃度為0.1mol/L略高。這種稀釋18倍后的Folin 試劑乙就是上文稱之為的“應用液”。Folin試劑乙貯備  液濃度的標定,一般是以酚酞為指示劑。用Folin試劑乙去滴定1mol/L左右的標準氫氧化鈉溶液,當溶液顏色由紅變為紫灰,再突然變成墨綠即為終點,如果用氫氧化鈉去滴定Folin試劑乙,終點不太好掌握,溶液地顏色是由淺黃變為淺綠,再變為灰紫色為終點。


 8DNS試劑                           

□配置方法 1.取3,5-二硝基水楊酸10g,加入2mol/L氫氧化鈉溶液200mL。 (3,5-二硝基水楊酸試劑)                      

2.將3,5-二硝基水楊酸溶解,然后加入酒石酸鉀鈉300g。

3. 待其完全溶解,用去離子水稀釋至2000mL,棕色瓶保存。


 95%蔗糖溶液                  □組份濃度 5%
                                               □配制量1L
              □配置方法 稱取蔗糖50g,用去離子水溶解定容至1L。


 100.1mol/L蔗糖溶液      □組份濃度 0.1mol/L 
                                               □配制量1L
                                               □配置方法 稱取蔗糖34.230g,用去離子水溶解并定容至1L。


1120%乙酸溶液             □組份濃度 20%
                                              □配制量1.2L
    □配置方法 量取冰乙酸300mL,用去離子水稀釋至1200mL。


 1230%(W/VAcrylamide   

□組份濃度 30%(W/V)Acrylamide 0.05%
 □配制量1L
 □配置方法 1.稱量下列試劑,置于1L燒杯中
                                                 Acrylamide  290g 
                                                  BIS                   10g
             2.向燒杯中加入約600mL的去離子水,充分攪拌溶解 
             3.加入去離子水將溶液定容至1L,用0.45μm濾膜濾去雜質。
             4.于棕色瓶中4℃保存。
      注意:丙稀銑胺具有很強的神經毒性,并可通過皮膚吸收,
                其作用有積累性,配制時應戴手套等。聚丙烯酰胺無
                毒,但也應謹慎操作,因為有可能含有少量的未聚合成份。


 1340%(W/VAcrylamide    

 □組份濃度 40%(W/V)Acrylamide 0.05%
 □配制量1L
   □配置方法 1.稱量下列試劑,置于1L燒杯中
                                                  Acrylamide    380g
                                                  BIS                    20g
                       2.向燒杯中加入約600mL的去離子水,充分攪拌溶解
                       3.加入去離子水將溶液定容至1L,用0.45μm濾膜濾去雜質。 
                       4.于棕色瓶中4℃保存。
注意:丙稀銑胺具有很強的神經毒性,并可通過皮膚吸收, 其作用有積累性,配制時應戴手套等。聚丙烯酰胺無 毒,但也應謹慎操作,因為有可能含有少量的未聚合成份。


1410%(W/V)過硫酸銨       

  □組份濃度 10%(W/V)過硫酸銨 
 □配制量      10mL
  □配置方法 1.稱取1g過硫酸銨。
                       2.加入10mL的去離子水后攪拌溶解。
                       3.貯存于4℃。
  注意:10%過硫酸胺溶液在4℃保存時間可使用2周左右,
              超過期限會失去催化作用。


15、考馬斯亮藍R-250染色液

□組份濃度 0.1%(W/V)考馬斯亮藍R-250,25%(V/V)異丙醇,
                                                                            10%(V/V)冰醋酸
                                                      □配制量      1L
      □配置方法 1.稱取1g考馬斯亮藍R-250,置于1L燒杯中。
                           2.量取250mL的異丙醇加入上述燒杯中,攪拌溶解。
                           3.加入100mL的冰乙醋酸,均勻攪拌。
                          4.加入650mL的去離子水,均勻攪拌。
                           5.用濾紙出去顆粒物質后,室溫保存。


16、考馬斯亮藍染色脫色液    

□組份濃度 10%(V/V)醋酸,5%(V/V)乙醇
   □配制量1L
   □配置方法 1.量取下列溶液,置于1L燒杯中。
                                         醋酸     100mL
                                        乙醇        50mL 
                                           dH2O     850mL
              2.充分混合后使用。


17、凝膠固定液                       

 □組份濃度 50%(V/V)甲醇,10%(V/V)醋酸
(SDS-PAGE銀氨染色用)           □配制量100L

 □配置方法 1.量取下列溶液,置于1L燒杯中。
                                             甲醇   500mL
                                            醋酸 100mL 
                                            dH2O 400mL
                     2.均勻混合后室溫保存。


18、凝膠處理液                        

□組份濃度 50%(V/V)甲醇,10%(V/V)戊二醛
(SDS-PAGE銀氨染色用)          □配制量1L
 □配置方法 1.量取下列溶液,置于1L燒杯中。
                                           甲醇       50mL
                                            戊二醛   10mL 
                                             dH2O     40mL
                      2. 均勻混合后室溫保存。


19、凝膠染色液                       

□組份濃度 0.4%(W/V)硝酸銀,1%(V/V)濃氨水,
      (SDS-PAGE銀氨染色用) 0.04%(W/V)氫氧化鈉
                                                     □配制量     100L
 □配置方法 1.量取下列試劑,加入100~200mL試劑瓶中。
                                      20%硝酸銀 2mL
                                              濃氨水 1mL
                                    4%氫氧化鈉 1mL
                                                  dH2O 96mL 
         2.均勻混合。該溶液應為無色透明狀。如氨水濃度過低時溶液 
            會呈現混濁狀,此時應補加濃氨水,直至透明。
        3.本染色液應現用現配,不宜保存。 


20
、顯影液                                

□組份濃度 0.005%(V/V)檸檬酸,0.02%(V/V)甲醛
(SDS-PAGE銀氨染色用)           □配制量1L
                   □配置方法 1.稱取下列試劑,置于1L試劑瓶中。
                                                                                       檸檬酸 50mg
                                                                                           甲醛 0.2mL 
                                      2.加入1L去離子水后,搖動混合后溶解。
                                      3.室溫保存。 


21
45%乙醇溶液                   □組份濃度 45% 
                                                    □配制量1L 
   □配置方法 量取無水乙醇450mL,加入去離子水550mL,混勻。


225%的十二烷基硫酸鈉溶液 □組份濃度 5%
       (W/V)                                   □配制量0.1L

配置方法:稱取5.0g十二烷基硫酸鈉,溶于100mL4%的乙醇溶液中。


23、三氯甲烷-異戊醇混合試劑

配置方法 取500mL三氯甲烷試劑,加入21mL異戊醇試劑,混勻。 


24
1.6%乙醛溶液                     □組份濃度 1.6%
                                                       □配制量0.1L
       □配置方法 取47%乙醛3.4mL,用去離子水定容至100mL。


25、二苯胺試劑                          

□配置方法 1.稱取二苯胺試劑0.8g,溶解于180mL冰乙酸中, 
                     2.再加入8mL高氯酸混勻。
                     3. 臨用前加入0.8mL 1.6%乙醛溶液。 
                    注意:配制完成后試劑應為無色。


2615%三氯乙酸溶液              □組份濃度 15% 
                                                       □配制量        2L
  □配置方法 稱取三氯乙酸300g,用去離子水溶解定容至2000mL。 


271%谷氨酸溶液                    □組份濃度 1%
                                                       □配制量      0.5L 
         □配置方法 1.稱取5g谷氨酸,先用適量得用去離子水溶解。
                           2. 再用氫氧化鉀溶液中和至中性。
                            3. 最后用去離子水定容至0.5L。


281%丙酮酸溶液                    □組份濃度     1%
                                                       □配制量     0.5L
           □配置方法 1.稱取5g丙氨酸,先用適量得用去離子水溶解。 
                                2. 再用氫氧化鉀溶液中和至中性。
                                3. 最后用去離子水定容至0.5L。


290.1%的碳酸氫鉀溶液       □組份濃度 0.1% 
                                                     □配制量     0.5L
           □配置方法 稱取碳酸氫鉀0.5g,用去離子水溶解定容至0.5L。


300.05%的碘乙酸溶液       □組份濃度 0.05%
                                                    □配制量0.25L
       □配置方法 稱取0.125g碘乙酸,用去離子水溶解定容至0.25L。


31Locke氏溶液                    □配制量2L
配置方法 稱取18g氯化鈉,0.84g氯化鉀,48g氯化鈣,0.3g碳酸
                  氫鈉,2g葡萄糖,用去離子水溶解定容至2000mL。


320.2mol/L的丁酸溶液      □組份濃度 0.2mol/L
                                                   □配制量1L
         □配置方法 1.量取18mL正丁酸試劑。
                              2.用1mol/L的氫氧化鈉中和。
                              3.再用去離子水定容至1L。


330.1mol/L的硫代硫酸鈉溶液 □組份濃度 0.1mol/L
                                                           □配制量     10L 
     □配置方法 稱248.17g硫代硫酸鈉,用去離子水溶解并定至10L。


340.1mol/L的碘溶液          □組份濃度 0.1mol/L
                                                   □配制量1L
     □配置方法 1.稱取碘12.7g和碘化鉀25g。
                         2.用去離子水溶解并定容至1L。 
                                 3.用0.1mol/L的硫代硫酸鈉標定。 


3510%氫氧化鈉溶液           □組份濃度 10%
                                                    □配制量2L
        □配置方法 稱取200g氫氧化鈉,用去離子水溶解并定容至2L。


3610%鹽酸溶液                  □組份濃度 10%
                                                   □配制量0.2L
        □配置方法 量取濃鹽酸49.3mL,用去離子水定至0.2mL。


370.1%標準丙氨酸溶液      □組份濃度 0.1%
                                                    □配制量0.5L
      □配置方法 稱取丙氨酸0.5g,用去離子水溶解并定容至0.5mL。


380.1%標準谷氨酸溶液      □組份濃度 0.1%
                                                    □配制量    0.5L 
      □配置方法 稱取谷氨酸0.5g,用去離子水溶解并定容至500mL。


390.1%水合茚三酮乙醇溶液 □組份濃度 0.1%
                                                         □配制量         1L 
      □配置方法 稱取1g水合茚三酮試劑,溶于1000mL無水乙醇中。


40、酚溶液                                   

□配置方法 在大燒杯中加入80mL去離子水,再加入300g苯酚,在水 浴中加熱攪拌、混合至苯酚完全溶解。將該溶液倒入盛有200mL去離子水的1000mL分液漏斗內,輕輕振蕩混合,使其成為乳狀液。靜止7~10小時,乳狀液變成兩層透明溶液,下層為被水飽和的酚溶液,放出下層,貯存于棕色瓶中備用。

 
41
0.5%淀粉溶液                      □組份濃度 0.5%
                                                         □配制量    0.1L
        □配置方法 稱取淀粉0.5g,用去離子水溶解定容至0.1L。 


42
、對羥基聯苯試劑                   

配置方法 稱取對羥基聯苯1.5g,溶于100mL0.5%氫氧化鈉溶液中,
                配制成1.5%的溶液。若對羥基聯苯顏色較深,應用丙酮

或 無水乙醇重結晶,放置時間較長后,會出項針狀結晶,應搖勻后使用。


生物化學實驗常用緩沖液的配制方法
10.2 mol/L 磷酸緩沖液      □組份濃度 0.2mol/L
    
pH 6.0                           □配制量1L 
            □配置方法 1. 稱取磷酸氫二鈉?12水8.82 g。
                                2. 稱取磷酸二氫鈉?2水27.34g。
                               3. 用去離子水溶解并定容至1L。室溫保存。
                     注意:此為母液,使用時稀釋40倍使用。


2、洗脫液                                 □組份濃度 0.15mol/L
     (含0.15mol/L                □配制量      10L
     化鈉的0.005mol/L              □配置方法 1.稱取氯化鈉87.66g。
     pH 6.0的磷酸緩沖液)                         2. 用0.2mol/L pH6.0的

磷酸緩沖液250mL溶解。
                                              3. 用去離子水稀釋至10 L。室溫保存。  


30.3mol/L磷酸緩沖液        □組份濃度 0.3mol/L
      pH7.8                           □配制量      0.5L
                           □配置方法 1.準確稱取磷酸氫二鈉?12水49.150g。
                                                2.磷酸二氫鈉?2水2.000g。
                                    3. 用去離子水溶解并定容至0.5L。室溫保存。
                         注意:此為母液,使用時稀釋10倍使用。


40.2mol/L乙酸緩沖液        □組份濃度 0.2mol/L
      pH4.6                           □配制量       2L 
                    □配置方法 1.準確稱取乙酸鈉?3水54.44g。
                                        2. 加入23mL冰乙酸,溶解。
                                         3. 用去離子水溶解并定容至2L。4℃保存。


50.2mol/L磷酸-檸檬酸      □組份濃度 0.2mol/L
       緩沖液                                □配制量     各1L
     pH 2.64.66.6       

□配置方法  1. 母液A(0.2mol/L的Na2HPO4溶液):稱取Na2HPO4?12水143.256g, 用去離子水定容至2L。
                      2. 母液B(0.1mol/L的檸檬酸溶液):稱取檸檬酸?1水42.028g 用去離子水溶解定容至2L。 
                       3. pH2.6、4.6、6.6的三種緩沖液如下表配制: 
                           pH值 A(mL) B(mL) 
                           2.6     109.0        891.0 
                           4.6      467.5       532.5 
                            6.6       727.5      272.5 
                       4. 按上表混勻后,4℃保存。


620×SSC 緩沖液                 □配制量      1L
      pH7.0                          □配置方法 1.準確稱取175.2g氯化鈉。
                                                  2.準確稱取88.2g檸檬酸鈉?2水。
                                                 3.溶解于800mL去離子水中。
                           4.加入數滴10mol/L氫氧化鈉溶液調節pH值至7.0。
                                               5.加去離子水定容至1L。 
                      注意:按實驗需要可分裝后高壓滅菌。
        10×SSC、5×SSC、1×SSC可由20×SSC做相應稀釋得到。 


70.15mol/L氯化鈉-                 □組份濃度    0.15mol/L
      乙二胺四乙酸二鈉                □配制量      1L
      緩沖液                  □配置方法   1.準確稱取氯化鈉8.77g。
     pH8.0                                     2. 稱取乙二胺四乙酸二鈉37.2g。
                                                          3. 溶于800mL去離子水中。
                                                    4.用固體的氫氧化鈉調pH值為8.0。 
                                                   5.加去離子水定容至1L。 


81/15mol/L的磷酸鹽              □組份濃度 0.15mol/L
       緩沖液                                     □配制量     1L
      pH7.6                              

  □配置方法

1.溶液甲(1/15mol/L的KH2PO4溶液):稱取KH2PO4 9.078g,用去離子水溶解定容至1L。 
 2. 溶液乙(1/15mol/L的Na2HPO4溶液):稱取Na2HPO4? 2水11.876g(或磷酸氫二鈉?12水23.894g)用去離子水溶解定容至1L。
 3.pH7.6磷酸鹽緩沖液:將①和②按1.4:8.6比例混合即可。


95×Tris-GlycineBuffer         □組份濃度0.125MTris,1.25MGlycine,0.5%(w/v)SDS
SDS-PAGE電泳緩沖液)      □配制量       1L 
  □配置方法 1.稱取下列試劑,置于1L燒杯中。
                                                                                   Tris          15.1g
                                                                                   Glycine       94g
                                                                                   SDS           5.0g
                       2.加入約800mL的去離子水,攪拌溶解。
                       3.加去離子水將溶液定容至1L后,室溫保存。 


105×SDS-PAGE                  □組份濃度250mMTris-HCl(pH6.8)
        Loading Buffer                                    10%(W/V) SDS 
                                                                       0.5%(W/V) BPB 
                                                                       50%(V/V) 甘油 
                                                                       5%(W/V) β-巰基乙醇 
                                                        □配制量         5mL 
            □配置方法 1.量取下列試劑,置于10mL塑料離心管中。 
                                                                             1MTris-HCl 1.25mL
                                                                                SDS0.5g
                                                                                BPB 25mg
                                                                                甘油 2.5mL
                                     2.加入去離子水溶解后定容至5mL。
                                    3.小份(500μl/份)分裝后,于室溫保存。
                                     4.使用前將25μl的2-ME加到每小份中。
        5.加入2-ME的Loading Buffer可在室溫下保存一個月左右