磁珠法GST pull down實驗原理及操作
一、GST pull-down 基本知識
1. GST pull-down 概念
GST pull-down：是利用重組技術將探針蛋白與 GST 谷胱苷肽巰基轉移酶融合，融合蛋白通過 GST 與固相化在球珠上的 GSH 谷胱甘肽結合。從而分離出能與融合蛋白相互作用的蛋白的技術。
2. GST pull-down 研究對象
二、GST pull-down 原理
1. GST pull-down 結合原理
構建GST標簽融合表達的蛋白，然后用谷胱甘肽磁珠結合GST融合蛋白。
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2. GST pull-down 分離原理
如果是采用磁珠的話，可以采用磁分離磁珠，而無需采用離心的方法。
三、GST pull-down 流程
1. 蛋白的抽提與純化：
① 原核表達蛋白純化
② 真核表達蛋白抽提
2. 體系孵育與 pull-down
3. 考染檢測與 WB 驗證
四、GST pull-down 結果
1. GST pull-down 結果分析
① 考馬斯亮藍檢測
② Western blot 驗證
五、GST pull-down 拓展
1. GST pull-down 與 Co-IP 區別
① GST pull-down
② Co-IP
GST pull-down 與 Co-IP 區別：
GST pull-down 是原核純化蛋白與真核蛋白在試管內發生生化反應互作的結果，只要互作蛋白間具有相互結合的結構域基礎即可實驗證明；
Co-IP 實驗是細胞內高表達目的蛋白，并通過 IgG 球珠-抗體-蛋白復合物體系，分離出互作的蛋白復合物，是細胞內的體內反應結合。
2. GST pull-down 實驗優點
① 可驗證蛋白質-蛋白質之間的直接互作。
② GSH 谷胱甘肽偶聯球珠親和力強，洗脫純度高。
3. GST pull-down 實驗缺點
① 驗證互作是在試管中進行的生化反應，不能夠完全反應細胞內蛋白真實互作狀態。
② 融合表達的 GST 標簽，肽鏈較長，可能會改變原目的蛋白的原有的折疊結構。
GST蛋白pull down磁珠請參考如下網頁：
200nmGSH磁珠 http://www.posuichina.com/Product/2897354213.html
20-45um 瓊脂糖GSH磁珠 http://www.posuichina.com/Product/3249714524.html
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