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規格
MS-AMN001
1 ml
MS-AMN010
10 ml
1. 產品描述
MagStart-Amine 是由超多孔聚合物網絡組成的磁性聚合物微載體。通過與各種化學偶聯劑對微粒（或生物制品）進行化學活化來共價偶聯生物配體。最常用的活化試劑包括N-羥基琥珀酰亞胺（NHS或Sulfo-NHS）和碳二亞胺衍生物（如1-乙基-3-[3-二甲氨基丙基]碳二亞胺鹽酸鹽），以及雙功能交聯劑（如戊二醛或1,4-丁二醇二縮水甘油醚）。MagStart微球技術的進步使生物分子可在整個微粒空間滲透和結合，為生物分子的固定化提供了極高的結合能力。可替代MagReSyn?-Amine的使用。
MagStart-Amine微粒極高的官能團密度為生物分子偶聯提供了高濃度的反應位點。MagStart-Amine的高結合載量允許減少高活性功能微粒的體積來實現實驗方案小型化，進而最大限度地減少所需試劑的體積，從而允許以更小的體積應用固定化配體。MagStart可快速磁分離（<10 秒），通過磁壓縮減少了洗滌和洗脫過程中顆粒間隙，從而提高了效率和回收率，強磁性還可防止微粒的意外丟棄而避免樣品損失。
Product Specifications
Description
Iron oxide-containing magnetic polymer microspheres
Application
Immobilization of proteins, peptides, enzymes, antibodies and other ligands
Matrix
Proprietary polymer
Core
Iron (II, III) oxide (Magnetite)
Functional group
Primary amine
Binding capacity
≥20 mg/ml (BSA)
Particle Size
~5–10 μm
Formulation
20 mg/ml suspension in 20% ethanol
Stability
pH 3.5~10, 4~60 ℃
Storage
Store at 4~8?C until expiry date on label. DO NOT FREEZE!
注意：不當儲存、微粒干燥、細菌污染或離心回收可能導致容量/性能的不可逆損失。使用前應充分混勻。
2. 偶聯流程
2.1. 樣品制備
有效固定配體的重要考慮因素是偶聯緩沖液的離子強度和pH值。偶聯緩沖液應不含伯胺類化合物（例如Tris）。如偶聯的樣品中含有可能干擾偶聯反應的污染物，例如鹽、糖、穩定劑或化合物，則應通過脫鹽、超濾或類似技術從樣品中去除這些成分。偶聯效率取決于配體，可能需要優化才能達到預期的結果。EDC/NHS 活化的蛋白質在加入 MagStart-Amine之前應進行脫鹽，因為這些副產物可能會干擾偶聯。
注意：所有試劑都應是新鮮制備的，并具有分析級，以確保最佳性能。下面描述的程序、方法、緩沖溶液和配體僅供參考，并非旨在限制。MagStart-Amine與一系列不同的配體固定緩沖液兼容。偶聯量取決于配體，應優化條件以確保獲得預期結果。
2.2. MagStart-Amine胺平衡
MagStart-Amine以 20 mg/ml懸浮于20% 乙醇液的形式提供。使用前需要去除運輸溶液，并在結合緩沖液中平衡微粒。可根據推薦的方案按比例放大或縮小以滿足您的要求。當前方案估計結合 ~1 mg 蛋白質。
1）通過渦旋混合3秒將MagStart-Amine徹底重懸，以確保懸浮液均勻。
2）將 50 μl （1 mg） MagStart-Amine轉移到新離心管中。我們建議使用低結合試管。
3）將離心管放在磁磁力架上，磁分離。
4）用移液管吸棄上清溶液。
5）在200 μl超純水或選擇用于配體偶聯的合適緩沖液中洗滌/平衡微粒。
6）將離心管放在磁力架上，磁分離吸出上清液。
7）重復步驟5和6，再洗滌兩次。
8）去除緩沖液后，MagStart-Amine即可進行配體結合的功能化。
2.3. MagStart-Amine的活化
圖1. 胺基活化成醛基偶聯流程
這里提供了一個戊二醛活化方案示例，用于胺化配體的偶聯。戊二醛是一種同雙官能團胺反應偶聯劑，可用于活化胺功能微粒的表面，并為隨后的含胺配體偶聯提供醛基。
備注： 本方案可根據使用其他同官能團或雜官能團偶聯劑偶聯的情況進行調整。戊二醛和其他雙官能偶聯試劑通常具有危險性和/或毒性，使用時應小心。
1） 在超純水（或固定化兼容的緩沖液，如 50 mM 三乙醇胺，pH 8.0）中配制 200 μl 的 5%戊二醛活化溶液。
注意：堿性 pH 有利于胺-醛反應，活化/固定化溶液的 pH 應大于 8.0
2）將戊二醛溶液加入 2.2 中洗滌/平衡過的磁微粒中，充分重懸后渦旋 3 秒鐘。
3）在室溫下攪拌 3 小時。
4）將離心管放在磁力架上，磁分離移去上清液。
5）用 200 μl 超純水洗滌兩次，然后用合適的無胺結合/偶聯緩沖液洗滌兩次。
6) 在微粒懸液中加入 2-10 mg/ml的配體或蛋白。
2.4蛋白質偶聯程序
注意：如用于固定的蛋白含量較低，可能會發生顆粒聚集。如您沒有足夠的蛋白與珠子偶聯，可以將載體蛋白（如BSA或酪蛋白）與感興趣的蛋白質混合，以提供足夠的含量，避免聚集。
1）在合適的偶聯緩沖液（不含伯胺，例如三乙醇胺，pH 8.0）中制備待偶聯蛋白，并添加到微粒懸液中。
2）在室溫下或在4°C下（對于溫度敏感的配體），攪拌反應2–24小時。
3）將離心管放在磁力架上，磁分離。
4）吸除上清或保留以供后續測定偶聯效率。
5）僅用200μl偶聯緩沖液洗滌兩次（兩次洗滌之間平衡1分鐘）。磁分離，吸棄上清。
6）可選：伯胺與醛的偶聯導致席夫堿鍵的形成。可以使用硼氫化鈉或氰基硼氫化鈉來實現該鍵的穩定。有關合適的方案，請查閱相關文獻。
7） 加入500μl含有過量含胺封閉劑的合適緩沖液（例如PBS中的200mM乙醇胺或天冬氨酸，pH 8.0），并在室溫下孵育3小時（或在4?C） 以封閉微粒剩余的活化胺基。
8）磁分離，吸棄多余的淬滅劑。
9） 可選：用500μl含0.5–1 M NaCl的緩沖溶液洗滌三次，以去除可能的非共價結合蛋白質和非反應物。磁分離，吸棄洗滌溶液。
10） 在合適體積的緩沖液中清洗/平衡含有固定化配體的微粒，以備儲存或進一步應用。
11） 固定化生物制品可與合適的防腐劑（如含0.05%疊氮化鈉的磷酸鈉緩沖液）在4°C下儲存。不要冷凍微粒。
3. 常見問題
問題
可能原因
改善方法
配體不與微粒結合
戊二醛溶液過期
使用新制備的5–10%戊二醛
不正確的結合pH
確保pH>8.0
校準pH計
蛋白質降解
添加蛋白酶抑制劑
樣品或溶液中的干擾物阻止結合
確保緩沖液不含伯胺，例如不使用Tris或甘氨酸緩沖液。如含則需脫鹽
微粒數量不足
增加顆粒的數量
蛋白質/配體含量過低
使用濃度更高的配體溶液，將總蛋白濃度增加到2~10 mg/ml
參考文獻：
1. Tang J X, Cabrera-Orefice A, Meisterknecht J, et al. COA5 has an essential role in the early stage of mitochondrial complex IV assembly[J]. Life Science Alliance, 2025, 8(3).
2. Wright S C, Motso A, Koutsilieri S, et al. GLP-1R signaling neighborhoods associate with the susceptibility to adverse drug reactions of incretin mimetics[J]. Nature communications, 2023, 14(1): 6243.
3. Guzman U H, Martinez-Val A, Ye Z, et al. Ultra-fast label-free quantification and comprehensive proteome coverage with narrow-window data-independent acquisition[J]. Nature biotechnology, 2024: 1-12.
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