1. 概述
PuriMagTM G-CHO醛基功能化磁性納米粒子是均一的、聚合物包覆的超順磁納米粒，親水表面確保磁珠在各種緩沖液中具有出色的分散性、低非特異吸附和易操作性，表面涂覆高密度醛基官能團可永久共價偶聯含伯胺的配體。PuriMagTM G-CHO醛基功能化磁珠最適合與蛋白質和小肽的偶合。PuriMagTM G-CHO醛基功能化磁珠可用于偶聯肽、蛋白、酶、抗體和氨基修飾的核酸等。PuriMagTM G-CHO醛基功能化磁珠適用于各種磁分離應用，包括親和力富集、蛋白質純化、免疫沉淀和細胞分選。
特點和優點：
w 偶聯條件：pH 4~10、4~25℃、2~16 h 偶聯較高效；
w 水不溶性配體可在終濃度為10~30％的丙酮、二惡烷或醇、二甲基甲酰胺（DMF）或二甲亞砜（DMSO）偶聯緩沖液中或在偶聯緩沖液中含6M鹽酸胍或4 M尿素；
w 穩定的共價鍵和低水平的配體泄漏；
w 產生可重復使用的免疫親和基質；
w 低非特異性結合；
w 固定1~50 mg蛋白質或0.1~5mg肽/ g磁珠；
w 應用：抗體、蛋白質/肽、DNA / RNA的純化；細胞分選；免疫沉淀；
w 偶聯方便快速；
偶聯原理：
2. 產品信息
Product Specifications
Description
Polymer coated Fe3O4 nanoparticles
Particle Size
200 nm
Number of Beads
~1.7×1010 beads/mg
Matrix
Proprietary polymer
Functional group
Aldehyde group
Group density
~300 μmole / g of Beads
Magnetization
60~70 EMU/g
Formulation
10 mg/ml suspension in DI water
Stability
pH 3.5~10, 4~80 ℃, most organic solvents
Storage
1 year at 4~8 ℃. Do not freeze.
3. 使用方法
注意：以下方案是將將蛋白質和/或肽偶聯至PuriMagTM醛基活化磁性納米粒子的示例。
強烈建議針對具體樣本優化磁珠用量。如配體負載太低，則可能導致非特異結合。如配體負載過高，可能會導致空間位阻。建議每g磁珠使用1~50 mg蛋白或0.1~5 mg肽來制成親和基質。該方案可相應地按比例放大和縮小。
A. 所需材料
1）磁力架（用于手動操作）：用于容納12個單獨的1.5~2ml離心管（Mrack02）；用于容納2個50 ml離心管或2個15 ml離心管（目錄號Mrack03）
2）可溶配體偶聯緩沖液：0.1 M sodium phosphate, pH 7.0；
不可溶配體偶聯緩沖液：0.1 M sodium phosphate, pH 7, 10-30% acetone, or dioxane, or alcohols, or dimethylformamide (DMF), or dimethylsulfoxide (DMSO) or 6 M Guanidine?HCl or 4 M Urea ；
注意：偶聯緩沖液的離子強度對獲得更高的偶聯效率至關重要。偶聯緩沖液應具有最小的離子強度，且不包含任何氨基（如Tris）或其他親核試劑。洗滌或儲存緩沖液可包含氨基。因為氰基硼氫化鈉有劇毒，所以請在化學通風櫥中準備緩沖溶液。
3）封閉緩沖液：1 M Tris?HCl, 0.05% NaN3, pH 7.4；
4）洗滌緩沖液：1 M NaCl, 0.05% NaN3；
5）氰基硼氫化鈉(5 M): NaCNBH3 dissolved in 1 M NaOH
B. 磁珠的準備
注意：將PuriMagTM醛基磁珠按10mg/ml懸浮在水中，分散磁珠4 ℃保存。用前混勻。
1) 將2 mg磁珠轉移至EP管中。
2) 將EP管置于磁磁力架上1min，吸棄上清液，用50 ul偶聯緩沖液重新懸浮磁珠。
3) 重復步驟2三次。
注意：一旦水化，由于官能團的穩定性，應盡快使用磁珠。
C. 蛋白質偶聯
1）如果可溶，將50-200μg蛋白質/肽溶解在100μl可溶性偶聯緩沖液中。如果不溶，則溶于100μl不溶偶聯緩沖液中。如果樣品已經懸浮在其他緩沖液中，請用4倍體積的偶聯緩沖液稀釋樣品，或進行脫鹽或透析，以將緩沖液更換為偶聯緩沖液。
注意：醛活化的磁珠的偶聯效率因配體而異。使用者應根據經驗優化配體的濃度。建議蛋白質結合使用0.5~10 mg / ml。對于小肽，配體的濃度應為每毫升至少200μmol配體。
2）在通風櫥中，將蛋白質溶液和1μl的NaCNBH3溶液（每毫升總體積10ul，最終濃度50mM）加入珠中。重懸磁珠并通過移液將其很好地混合。在室溫或4℃下連續旋轉孵育反應過夜。
3）按照步驟B2所述，用1 ml偶聯緩沖液洗滌磁珠3次。
4）向PuriMagTM磁珠中添加0.1~0.5ml封閉緩沖液和0.5-1μl的NaCNBH3溶液（每毫升總體積10ul，最終濃度50 mM），在室溫下孵育1小時或在4℃下孵育過夜。
5）按照步驟2所述，用1 ml洗滌緩沖液洗滌小珠4-6次。
6）用0.1%的NaN3（w / v）將PuriMagTM磁珠重懸于PBS緩沖液中至所需濃度，并在4℃下儲存直至使用。不要凍結。
D. 一般親和純化方案
注意：設計通用的純化DNA或RNA的方案相對簡單，因為核酸的生化特性相對一致。但是，設計一種通用的親和純化方案非常困難，因為每種蛋白質都有不同的組成和結構。為了獲得最佳結果，每個用戶都必須為各個應用程序確定最佳工作條件。
1）將最適量的PuriMagTM磁珠轉移到離心管中。磁分離1~3分鐘，除去上清液。
注意：強烈建議根據粗樣品中目標蛋白的量進行滴定，以優化用于每種應用的磁珠的量。所用磁珠過多會導致較高背景，而所用磁珠太少則會導致較低產量。每mg的磁珠通常結合1~20 ug的目標蛋白。
2）取下離心管，用5倍磁珠體積的PBS緩沖液懸浮30秒。磁分離1~3分鐘，除去上清。
3）重復步驟2兩次
4）將洗滌過的PuriMagTM磁珠加入含有目標蛋白的粗樣品中，并在室溫或所需溫度下孵育1~2小時（較低的溫度需要更長的孵育時間）。
5）用5倍磁珠體積的PBS緩沖液或1M NaCl充分洗滌磁珠，直到280 nm洗脫液的吸光度接近背景水平（OD 280 <0.05）。
6）通過適當的方法洗脫目標蛋白，例如低pH（2~4）、高pH（10~12）、高鹽、高溫、親和洗脫或在SDS-PAGE上樣緩沖液中煮沸。
（本磁珠僅供科研使用！）
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