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規格
MS-SAX001
1 ml
MS-SAX010
10 ml
1. 產品描述
MagStart-SAX（強陰離子交換劑）是一種專有磁性聚合物微粒，設計用于生物分子的分離、純化和回收，例如蛋白質/肽、酶、抗體、DNA 或 RNA 。通過利用靜電荷的差異，這些生物分子通常表現帶負電荷，并容易且可逆地吸附到帶正電荷的MagStart-SAX微粒。
MagStart的技術有別于傳統的固相載體或微珠技術在于它是一種超多孔聚合物微粒，允許生物分子滲透和結合的網絡遍布整個微粒體積中，導致非凡的生物分子結合的能力。高官能團密度允許多點連接和結合，從而實現靶生物分子的強離子結合。這一進步將吸附容量轉化為數量級的改進，性能優于其他技術。MagStart-SAX 可替代MagReSyn?-SAX，非常適合1D 或 2D電泳、 HPLC或質譜之前，復雜生物混合物的分餾（例如培養上清液、血清或血漿）。MagStart可快速磁分離（<10 秒），通過磁壓縮減少了洗滌和洗脫過程中顆粒間隙，從而提高了效率和回收率，強磁性還可防止微粒的意外丟棄而避免樣品損失。
Product Specifications
Description
Iron oxide-containing magnetic polymer microspheres
Application
Fractionation/purification of proteins, peptides, enzymes, antibodies, DNA, RNA
Matrix
Proprietary polymer
Core
Iron (II, III) oxide (Magnetite)
Functional group
Quaternary ammonium
Binding capacity
≥20 mg/ml (BSA)
Particle Size
~5–10 μm
Formulation
20 mg/ml suspension in 20% ethanol
Stability
pH 3.5~10, 4~60 ℃
Storage
Store at 4–8?C until expiry date on label DO NOT FREEZE
注意：不當儲存、微粒干燥、細菌污染或離心回收可能導致容量/性能的不可逆損失。使用前應充分混勻。
2. 結合流程
生物分子基于陰離子交換吸附結合分析中，結合緩沖液的離子強度要低，結合溶液的pH值應至少高于目標生物分子的等電點 （pI）1單位。當 pH值高于 pI 時，生物分子將帶負電荷并將吸附到陰離子交換劑的陽性基團（季銨）上。
圖1. 三種不同生物分子的理論滴定曲線表明表面凈電荷的pH依賴性
注意：所有試劑都應是新鮮制備的分析級，確保最佳性能。下面描述的緩沖溶液作為一個例子，并非限制。MagStart-SAX 與一系列不同的緩沖液兼容，用于結合/吸附和洗脫/解吸。
2.1. MagStart-SAX胺平衡
MagStart-SAX以 20 mg/ml懸浮于20% 乙醇液的形式提供。使用前需要去除運輸溶液，并在結合緩沖液（例如 50 mM Tris，pH8.0）中平衡微粒。可根據推薦的方案按比例放大或縮小以滿足您的要求。當前方案估計結合 ~1 mg 蛋白質。
1）通過渦旋混合3秒將MagStart-SAX徹底重懸，以確保懸浮液均勻。
2）將 50 μl （1 mg） MagStart-SAX轉移到新離心管中。我們建議使用低結合試管。
3）磁分離，吸棄上清溶液。
4）在250 μl結合緩沖液中（50 mM Tris or triethanolamine, pH 8.0.）洗滌/平衡微粒1分鐘。
5）磁分離，吸出上清液。
6）重復步驟4）和5）兩次，總共洗滌三次。
7）去除緩沖液后，磁珠即可用于生物分子結合。
2.2. 蛋白質結合流程
蛋白質樣品制備后，建議通過0.2 μm過濾器過濾所有樣品或以10,000×g離心5分鐘，去除可能干擾生物分子結合的顆粒。
1）將含有最多 1 mg 總蛋白的蛋白質樣品（在合適的結合緩沖液中）添加到平衡的 MagStart-SAX 中。用結合液將總反應體積調節至至少250 μl，并通過移液或渦旋3秒充分混合。
注意：為確保結合，蛋白質必須處于兼容的結合緩沖液中;可以使用PD-10色譜柱或類似物將蛋白質樣品緩沖液置換到合適的緩沖液中。
2）讓蛋白質在室溫下與微粒結合5-10分鐘。連續混合以確保結合過程中樣品與微粒的良好互作。
3）將試管放在磁選機上，讓微粒清除。通過移液吸除上清。上清可以丟棄或用于蛋白質定量。
4）加入至少250 μl結合緩沖液以洗滌微粒，并通過渦旋混合重懸3秒。
5）磁分離回收磁珠。在管子就位的情況下反轉磁鐵，清液沖洗卡在管蓋中的微粒以完全收集磁珠。
6）用移液管除去上清液。上清液可以丟棄或用于蛋白質定量。
7）重復步驟4-6兩次，共洗滌三次。
2.3. 蛋白質洗脫程序
吸附的蛋白質/肽混合物可以通過緩沖液鹽濃度增加或pH值降低逐步洗脫進行分餾。
2.3.1. 分餾：增加鹽濃度
1）將微粒與2.2吸附的蛋白質/肽混合物重懸于50μl洗脫緩沖液（例如50mM Tris pH 8.0, 50mM NaCl）中，并在室溫下解吸2分鐘。
2）磁分離，用移液管吸出上清液。保留上清液用于蛋白質定量或進一步分析。
3）重復步驟1和2兩次，以提高分離蛋白的回收率。混合等效鹽濃度的洗脫液，用于進一步分析。
4）使用鹽濃度增加的洗脫緩沖液（例如50 mM Tris pH 8.0，100、150、200或250 mM NaCl等）重復步驟1-3。注意：如需要，洗脫緩沖液的鹽濃度可增加到2M NaCl。
5）洗脫的樣品含有差異分餾的蛋白質/肽。
2.3.2. 分餾：降低pH值
1）將微粒與2.2吸附的蛋白質/肽混合物重懸于50μl洗脫緩沖液（例如50mM Tris，pH 7.5）中，并在室溫下解吸2分鐘。
3）重復步驟1和2兩次，以提高分離蛋白的回收率。混合等效pH值的池洗脫液用于進一步分析。
4）使用pH值降低的洗脫緩沖液重復步驟1-3（例如，pH 7.0、pH 6.5等下為50 mM Tris）。洗脫的樣品現在含有原始蛋白質/肽混合物的差異部分。
3. 常見問題
問題
可能原因
改善方法
蛋白質未如預期那樣與微粒結合
弱離子相互作用
降低結合液的離子強度（鹽濃度）
不正確的結合pH
檢查和調整結合液pH，檢查電極校準
蛋白質降解
添加蛋白酶抑制劑
樣品或溶液中的干擾物阻止結合
將樣品脫鹽或透析到推薦的結合液中，以去除培養基成分/其他污染物
微粒數不足
增加顆粒的數量
蛋白質含量過低
通過樣品濃度增加蛋白質含量或制備更多起始材料
洗脫過程中蛋白回收率低
離子相互作用太強
增加洗脫緩沖液中的NaCl濃度
pH值太堿性
降低洗脫液pH值，以降低微粒和生物分子間的離子相互作用強度。
蛋白質降解發生在純化過程中
在樣品和緩沖液中加蛋白酶抑制劑以防蛋白水解；使用新制的樣品和溶液；縮短制樣時間；盡量降低溫度。
蛋白在洗脫液中可能不穩定或失活
確定目標蛋白的最佳pH值和鹽穩定性
蛋白質分離不足
餾分之間的蛋白質殘留
在餾分之間，包括每次 NaCl洗脫之間洗滌步驟，使用較低NaCl濃度增量增加
目標蛋白凈電荷與污染蛋白相似
優化樣品制備步驟；優化洗脫液NaCl濃度和pH 值。
洗脫后靶蛋白失活
緩沖劑或鹽的干擾
通過分餾后透析、過濾、沉淀或體積排阻色譜除去鹽。
降低洗脫液濃度或在酸性緩沖液中洗脫，如檸檬酸鹽pH3–4；使用NaOH或合適緩沖液洗脫后立即增加pH值。
靶蛋白與下游應用不相容
洗脫使用的 NaCl 或緩沖劑的干擾
通過透析、過濾、沉淀或尺寸排阻去除藥劑
應用參考文獻：
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