I. 簡介
核苷酸、輔因子和糖蛋白是碳水化合物的代謝衍生物。在結(jié)構(gòu)上，都具有順式-1,2-和1,3-二醇作為常見官能團(tuán)。當(dāng)置于合適pH的硼酸時，二醇轉(zhuǎn)化為穩(wěn)定的硼酸酯（如方案1）。將硼酸固定在載體上提供了一種有效的方法，用于從復(fù)雜混合物中分離多種含二醇的生物分子，從小分子到完整的糖蛋白和RNA。利用硼酸酯形成的可逆性，捕獲的化合物可以在溫和的條件下方便地回收用于進(jìn)一步的應(yīng)用或分析。固定化的硼酸與糖（如甘露糖，半乳糖，葡萄糖或核糖）上的鄰位順式 - 二醇基團(tuán)結(jié)合。在結(jié)合和洗滌步驟之后，可以通過降低pH或通過添加山梨糖醇將含糖樣品從顆粒洗脫。同樣，固定化的硼酸與含有N-和O-連接寡糖的糖蛋白或糖肽反應(yīng)，可以用于純化特定蛋白和多肽?；诖胖楣潭ɑ呐鹚?b>PuriMag G-BA，因其突出的快速磁分離特性，為該過程提供了極大的方便，是分離含二醇的生物分子的有效工具。
純化方案1.硼酸與其相應(yīng)的硼酸酯的解離平衡（pKa?9），它與順式二醇官能團(tuán)反應(yīng)形成的四方硼酸酯易水解。可通過方法1）降低pH解離或通過方法2）用山梨糖醇競爭替代釋放被捕獲的二醇。
II. 產(chǎn)品信息
產(chǎn)品名稱：PuriMag G-BA
平均尺寸：0.2 μm (+/- 0.02μm)；
濃度：10 mg/ml (w/v: 10 mg/ml in ddH2O, 0.05 % sodium azide)；
磁性顆粒含量（每克干固體）> 80％；
III. 緩沖液
? Wash & Binding buffer (W & B buffer): 0.25 M ammonium acetate, 50 mM MgCl2, pH 9.5.
? Elution buffer: 50 mM Tris, 0.1 M sorbitol, pH 8.5.
Note: Instead of Elution buffer, elution with 75% MeOH containing 50mM formic acid may be helpful.
IV. 產(chǎn)品儲存
本產(chǎn)品在2?8°C儲存后，在購買日期后至少可穩(wěn)定1年。將珠粒保存在封閉的小瓶中并保持直立狀態(tài)，以防止珠子干燥。不要凍結(jié)產(chǎn)品。使用前使用渦珠懸浮液。 PuriMag G-BA與質(zhì)譜應(yīng)用中常用的溶劑兼容。
V. 通用方案
以下通用方案描述了含有鄰位順式-二醇的分子與PuriMag G-BA的結(jié)合和洗脫操作流程。
1. 在2 ml微量離心管中加入100μl的PuriMag G-BA微球，加入1.0 ml 的W＆B緩沖液。將試管置于磁力分離器上，等待30秒鐘，以從上清液中分離珠粒。取出上清液并重復(fù)此步驟兩次。用0.5 ml 的W＆B緩沖液完全重懸微球。
2. 將樣品加入微球并用W＆B緩沖液填充至最大體積1ml。
3. 通過溫和混合（管旋轉(zhuǎn)器）在室溫下孵育15-30分鐘。
4. 將試管放在磁力分離器上，等待30秒鐘，將珠子從上清液中分離出來。
5. 加入1.5 ml的 W＆B緩沖液，充分懸浮，磁分離，棄上清液，重復(fù)洗滌兩次。
6. 加入100μl洗脫緩沖液，渦旋并在室溫下在熱混合器中孵育15分鐘或者中間搖動試管。
7. 將試管置于磁分離器上，等待30秒鐘，以從上清液中分離珠粒。將上清液轉(zhuǎn)移至新管中，即為純化后的產(chǎn)物。
引用本磁珠參考文獻(xiàn)：
1. Bin Luo, et al. Construction of a magnetic covalent organic framework with synergistic affinity strategy for enhanced glycopeptide enrichment, Journal of Materials Chemistry B, 07 Jul 2021, https://doi.org/10.1039/D1TB01168E
2. Yiting Luo, et al. Mesoporous materials for glycopeptide separation, TrAC Trends in Analytical Chemistry, Volume 167, 2023, 117234, https://doi.org/10.1016/j.trac.2023.117234. （Si-BA磁珠分離糖蛋白）
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