1. 概述
PuriMagTM G-SH巰基功能化磁性納米粒子是均一的、聚合物包覆的超順磁納米粒，親水表面確保磁珠在各種緩沖液中具有出色的分散性、低非特異吸附和易操作性。巰基是一種官能團(tuán)，含有與氫原子相連的硫原子，常以后綴"-thiol" 和前綴 "mercapto-" 或 "sulfanyl."表示，硫醇對(duì)軟金屬有強(qiáng)烈的偏好。巰基磁珠專(zhuān)門(mén)設(shè)計(jì)用于偶聯(lián)SMCC（磺基琥珀酰亞胺基 4-[N-馬來(lái)酰亞胺甲基]環(huán)己烷-1-羧酸酯）修飾的蛋白質(zhì)/肽。SMCC 包含一個(gè)胺反應(yīng)性N-羥基琥珀酰亞胺（NHS酯）和巰基反應(yīng)性馬來(lái)酰亞胺基團(tuán)。NHS酯類(lèi)與伯胺發(fā)生反應(yīng)在pH 7-9下形成穩(wěn)定的酰胺鍵。馬來(lái)酰亞胺在pH 6.5-7.5下與巰基反應(yīng)，形成穩(wěn)定的硫醚鍵。這樣品制備過(guò)程快速直接，無(wú)需費(fèi)力的重復(fù)移液和離心。PuriMagTM G-SH巰基磁珠是偶聯(lián)大蛋白或小肽的理想選擇。PuriMagTM G-SH磁珠適用于各種磁分離應(yīng)用，包括親和力富集、蛋白質(zhì)純化、免疫沉淀和細(xì)胞分選。
特點(diǎn)和優(yōu)點(diǎn)：
w 偶聯(lián)條件：pH7.2、12 h 偶聯(lián)較高效；
w 穩(wěn)定的共價(jià)鍵和低水平的配體泄漏；
w 產(chǎn)生可重復(fù)使用的免疫親和基質(zhì)；
w 低非特異性結(jié)合；
w 應(yīng)用：抗體、蛋白質(zhì)/肽、DNA / RNA的純化；細(xì)胞分選；免疫沉淀；
w 偶聯(lián)方便快速；
w
偶聯(lián)示意圖：
2. 產(chǎn)品信息
Product Specifications
Description
Polymer coated Fe3O4 nanoparticles
Particle Size
200 nm
Number of Beads
~1.7×1010 beads/mg
Matrix
Proprietary polymer
Functional group
Sulfhydryl group
Group density
~300 μmole / g of Beads
Magnetization
60~70 EMU/g
Formulation
10 mg/ml suspension in ethanol
Stability
pH 3.5~10, 4~80 ℃, most organic solvents
Storage
1 year at 4~8 ℃. Do not freeze.
3. 使用方法
注意：以下方案是將將蛋白質(zhì)和/或肽偶聯(lián)至PuriMagTM巰基活化磁性納米粒子的示例。
強(qiáng)烈建議針對(duì)具體樣本優(yōu)化磁珠用量。如配體負(fù)載太低，則可能導(dǎo)致非特異結(jié)合。如配體負(fù)載過(guò)高，可能會(huì)導(dǎo)致空間位阻。建議每g磁珠使用1~50 mg蛋白或0.1~5 mg肽來(lái)制成親和基質(zhì)。該方案可相應(yīng)地按比例放大和縮小。
A. 所需材料
1）磁力架（用于手動(dòng)操作）：用于容納12個(gè)單獨(dú)的1.5~2ml離心管（Mrack02）；用于容納2個(gè)50 ml離心管或2個(gè)15 ml離心管（目錄號(hào)Mrack03）
2）偶聯(lián)緩沖液：PBS, PH 7.2； SMCC (Sulfosuccinimidyl 4-[N-maleimidomethyl]cyclohexane-1-carboxylate) or Sulfo-SMCC ；
B. 蛋白質(zhì)/肽制備：
1. 用 50 倍體積的 PBS（pH 7.2, 5mM EDTA）透析蛋白質(zhì)/肽。
2. 在蛋白溶液中加入適量SMCC，混合均勻。
注意：制備SMCC溶液（3.7mg/ml的DMF溶液。如果 SMCC 沒(méi)有完全溶解，請(qǐng)將試管放入 50°C 的水中泡幾分鐘。將 100 ul SMCC 溶液加入 1 ml 蛋白質(zhì)溶液 （10mg/ml） 中。或?qū)?50 ul SMCC 溶液加入 1 ml 蛋白質(zhì)溶液（<1mg/ml）。
3. 在 + 4°C 下孵育 2 小時(shí)或室溫孵育 30 分鐘。
4. 去除 Sephadex G15 色譜柱上的游離 SMCC 和未修飾的蛋白質(zhì)。用PBS緩沖液洗脫。蛋白質(zhì)SMCC的洗脫可以用分光光度計(jì)在206nm處監(jiān)測(cè)。
C．磁珠制備：
注意：稱(chēng)重，用PBS（濃度：10mg/ml）懸浮磁珠，通過(guò)劇烈渦旋分散磁珠，然后在 4°C 下儲(chǔ)存。在完全使用之前搖晃瓶子以重懸磁珠。
1. 搖晃瓶子，徹底重懸?guī)€基磁珠。
2. 將 100μl珠子 （10 mg/ml） 轉(zhuǎn)移到試管中。將試管放在磁架上 1-3 分鐘。移除上清液，而試管留在架子上。
3. 取出試管，用200μlPBS緩沖液徹底重懸珠子。將試管在室溫下放置 2-3分鐘。將試管放在磁架上 1-3 分鐘。當(dāng)試管留在架子上時(shí)取出上清液。
4. 重復(fù)步驟 3 兩次。
5. 將磁珠與 1 ml DTT（二硫蘇糖醇 3 mg/ml）在室溫下孵育 15 分鐘，然后用PBS緩沖液洗滌磁珠3次。
6. 將還原的磁珠與蛋白質(zhì)-SMCC 偶聯(lián)物混合，并在 +4°C 下孵育 12 小時(shí)。
7. 清洗磁珠并將它們重懸于所需的緩沖液中。
（本磁珠僅供科研使用！）
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